结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

发布时间：2023-10-28 17:18

　　目的建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45 min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检...

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【文章目录】：
材料和方法
    一、材料与设备
        1．试剂：
        2．细菌及来源：
        3．主要设备：
    二、引物设计及合成
    三、样品处理方法
    四、PSR检测方法的建立
    五、最低检出限评价
    六、痰涂片抗酸染色显微镜检及固体痰培养
    七、统计学处理
结果
    一、PSR检测结核分枝杆菌方法的建立
    二、最低检出限分析
    三、PSR检测结核病患者效能评价
讨论



本文编号：3857431