鼠疫血红素蛋白YpHmuT的表达、纯化及其性质研究

发布时间：2023-10-29 20:45

　　来自鼠疫耶尔森菌的血红素蛋白质Yersinia pestis HmuT(YpHmuT)隶属于第三类周质结合蛋白,其分子量大小为29.57 kD。YpHmuT是细菌摄取血红素的一个重要组成部分,在鼠疫耶尔森菌中YpHmuT可以将其所结合的血红素传递给血红素转运蛋白HmuUV,HmuUV进而将血红素转运进入细胞质。之前的研究描述了YpHmuT结合血红素前后的晶体结构。晶体结构叠加显示,结合血红素前后的两种形式的蛋白(apoYpHmuT和hemin-YpHmuT)在血红素结合位点周围的构象发生了微弱的变化。当结合血红素后,YpHmuT的N端和C端会发生一定程度的扭转。其中,N端结构域的变化主要为α螺旋的旋转。而C端结构域的α螺旋、β折叠、loop区均出现了一定程度的扭转。出乎意料地是,YpHmuT通过酪氨酸和组氨酸可结合两个血红素,而与之同源性较高其它周质血红素结合蛋白(如ShuT和PhuT)均只能结合一个血红素。本文在已有的研究基础上,对YpHnuT进行了的以下一系列研究:首先,本文通过对YpHmuT进行可溶性分析后发现其属于蛋白包涵体,利用尿素作为变性剂将蛋白变性,并通过透析的方法得到可...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1.1 鼠疫杆菌
    1.2 革兰式阴性菌体内的血红素转运机制
        1.2.1 血红素直接转运系统
        1.2.2 血红素载体Hemophore介导的血红素间接转运系统
    1.3 鼠疫血红素蛋白YpHmuT
        1.3.1 YpHmuT的一级结构
        1.3.2 YpHmuT的高级结构
    1.4 本课题研究的意义
第二章 YpHmuT的表达、纯化
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 YpHmuT的表达及可溶性分析
        2.3.2 YpHmuT的变复性处理
        2.3.3 YpHmuT的纯化
        2.3.4 目的蛋白YpHmuT的活性验证
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 YpHmuT的表达及可溶性分析
        2.4.2 YpHmuT的变复性处理
        2.4.3 YpHmuT的纯化
        2.4.4 YpHmuT的活性验证
    2.5 结论
第三章 YpHmuT与hemin/heme相互作用的性质研究
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 YpHmuT与hemin的相互作用测定
        3.3.2 YpHmuT与heme的相互作用测定
        3.3.3 紫外差光谱法测定YpHmuT与hemin/heme的相互作用
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 YpHmuT与hemin的相互作用
        3.4.2 YpHmuT与heme的相互作用
    3.5 结论
第四章 TNS探测YpHmuT的构象变化
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 主要试剂
        4.2.2 主要仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 荧光光谱的测定
        4.3.2 紫外光谱的测定
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 YpHmuT结合hemin/heme前后构象改变
        4.4.2 YpHmuT与TNS结合常数及相互作用的测定
        4.4.3 TNS和YpHmuT之间的能量转移
        4.4.4 不同浓度的血红素对YpHmuT构象的影响
        4.4.5 分子模拟TNS与YpHmuT的相互作用
    4.5 结论
第五章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式



本文编号：3858839