miR-146a在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中对TLRs信号通路的免疫调控作用研究

发布时间：2017-05-28 02:04

  本文关键词：miR-146a在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中对TLRs信号通路的免疫调控作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：结核病是由结核分枝杆菌(Tuberculosis, TB)感染引起的一种慢性消耗性人兽共患病,全世界约有20亿人感染该病,其中10%有可能发展为活动性肺结核。结核分枝杆菌的致病机理十分复杂,尤其是近年来耐药和耐多药结核菌的出现,给临床治疗结核病带来很大的困难,特别是和其他疾病混合感染(如HIV)增加了患者的死亡率。虽然卡介苗目前是预防结核病的唯一手段,但卡介苗的保护率很低,而且仅对儿童和未成年人有效,对成年人几乎没有保护作用。因此,寻求新的有效途径来防治结核病显得尤为重要。近年来发现,肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)作为肺脏的“物理屏障”,同肺泡巨噬细胞一起在机体对抗Mtb感染中发挥着重要的免疫调控功能。而miRNA是作为一种内源性具有调控功能的非编码RNA,在机体的发育、生理和病理发生过程中有着重要的调控功能。miRNA可以影响宿主抵抗Mtb的感染过程,其异常表达也与结核病的发生密切相关。众所周知,Toll样受体(Toll-like receptors.TLRs)作为先天免疫中的模式识别受体(PRR),是连接先天免疫和获得性免疫的“桥梁”,能够监视与识别各种不同的病原相关分子模式(PAMP),是机体抵抗病原菌(如Mtb)感染的“第一道屏障”。因此,为了揭示niRNA在肺脏AECⅡ细胞抗Mtb感染中与TLRs信号通路间的相互调控作用,本研究以AECⅡ细胞为细胞模型,建立结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv和减毒株BCG细胞-细菌互作模型,在前期测定miRNA差异表达谱的基础上,分析了Mtb感染前后AECⅡ细胞中TLRs信号通路的变化,以及niR-29a, miR-146a和miR-200c的表达情况,并进一步分析了在AECⅡ细胞中过表达miR-146a对TLRs信号通路的影响,获得了一下结果：(1)利用H37Rv和BCG分别感染AECⅡ细胞株A549,分析在感染6h,12 h和24 h时,检测TLRs信号通路、促炎细胞因子与miR-29a、miR-146a和miR-200c的表达变化。试验结果表明,A549细胞中TLR2/4、NFκB、MyD88的mRNA和蛋白表达水平在感染6h时显著升高,且H37Rv感染组高于BCG感染组；而促炎细胞因子TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和IL-12 α的mRNA表达水平随着感染时间升高,且H37Rv感染组TNF-α、IL-1α、IL-6和IL-8的表达显著高于BCG感染组,IL-12a差异不显著,而在H37感然组中IL-6在24h显著下降。miR-146a随着感染时间表达显著升高,且H37Rv高于BCG; miR-29a在感染6h时表达量H37Rv显著高于BCG,但在12h和24h时,BCG感染组miR-29a表达量较6h时显著升高,而H37Rv感染组miR-29a表达量显著下调,但这两个感染组12h与24h时间点的组内差异不显著；miR-200c在BCG感染组在3个时间点先降低后升高,表现为感染后表达抑制,而在H37Rv感染组内表达差异不显著,且表达量低于BCG感染组6h和24h的相应时间点。这为进一步分析在Mtb感染肺脏上皮Ⅱ型细胞中niR-146a与TLRs信号通路的免疫应答机制奠定了基础。(2)基于miR-146a作为TLRs信号通路的负调控因子,其表达量在Mtb感染AECⅡ细胞中呈上调趋势的试验结果,本实验构建并包装过表达niR-146a腺病毒载体,并分析了A549细胞中过表达miR-146a时在Mtb感染中,miR-146a对TLRs信号通路及细胞因子的表达调控作用,该试验结果表明,构建的过表达miR-146a腺病毒载体能够在293T细胞和A549细胞中过表达miR-146a;当过表达miR-146a时,在BCG感染组中TLR2的表达表现为感染后显著抑制,而H37Rv感染组中TLR2表达差异不显著；TLR4在BCG和H37Rv感染组中均表现为显著下调,这有可能是在AEC Ⅱ细胞中,TLR.2是以同源二聚体形式识别BCG,以TLR2/TLR4异源二聚体形式识别H37Rv。过表达miR-146a时,在BCG和H37Rv感染组中对TLR信号通路的下游分子MyD88、TRAF6、NF-κB和促炎细胞因子TNF-α、EL-6的表达均表现为感染后的抑制作用,而IL-8表达影响不明显。综上所述,在AECⅡ细胞抗Mtb感染的过程中,H37Rv对TLRs信号通路的活化和引起的炎性反应强于BCG,且miR-146a负调控TLRs信号通路中MyD88、TRAF、NF-κB和炎症因子IL-6等来参与调控AECⅡ细胞对Mtb的感染过程,这为进一步研究miRNA在AECⅡ细胞感染Mtb中的免疫调控作用丰富了材料。
【关键词】：肺泡Ⅱ型上皮细胞 Toll样受体信号通路 结核分枝杆菌 miRNA
【学位授予单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R52
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 中英文缩略表8-9
• 第一章 文献综述9-20
• 1.1 结核病及结核菌的介绍9
• 1.2 Toll样受体家族9-13
• 1.3 miRNA13-18
• 1.4 肺脏基本结构和肺泡Ⅱ型上皮细胞18-19
• 1.5 研究意义19-20
• 第二章 结核分枝杆菌强毒株和弱毒株感染A549细胞对TLRs信号通路和miRNA的表达的影响20-36
• 1. 材料20-24
• 2. 方法24-32
• 3. 结果32-34
• 4. 讨论与小结34-36
• 第三章 高表达miR-146a腺病毒的包装、验证和其在Mtb感染中的调控作用的研究36-56
• 1. 材料36-38
• 2. 方法38-49
• 3. 结果49-54
• 4. 讨论与小结54-56
• 结论56-57
• 参考文献57-64
• 附录64-65
• 致谢65-66
• 个人简历66-67
• 研究生期间发表的论文67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘光伟;夏雪培;赵勇;;Toll样受体信号传导途径的研究进展[J];动物学杂志;2005年06期

2 王晓龙;马军;秦建军;;miRNA-146a在炎症与肿瘤之间的调节作用[J];河南大学学报(医学版);2013年01期

3 王金星,赵小凡;无脊椎动物先天免疫模式识别受体研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2004年02期

4 常晓彤;辇晓峰;王振辉;;Toll样受体信号转导途径研究进展[J];生理科学进展;2011年05期

5 苏踊跃,罗向东;Toll样受体与天然免疫[J];生命的化学;2002年05期

6 谢建辉;顾建新;;C型凝集素[J];生命科学;2011年06期

7 章婷;张志明;赵本华;张智仁;苏艳华;;哺乳动物Toll样受体与组织再生修复[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年03期

8 薛茜;杨安钢;;miRNA在免疫系统中的研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年01期

9 于兰;吕青;夏aa;黄飞;陈秋兰;陈明亭;张慧;;2010年全国结核病防治核心信息全民知晓率调查分析[J];中国防痨杂志;2013年01期

10 陈海敏;侯健;;MyD88 L265P突变与B细胞肿瘤[J];中国实验血液学杂志;2014年01期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 徐yN慧;日本囊对虾模式识别受体抗病毒功能研究[D];山东大学;2014年

2 马春燕;miRNA-124在肺泡上皮细胞和巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控机制研究[D];宁夏大学;2014年

  本文关键词：miR-146a在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中对TLRs信号通路的免疫调控作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：401642