新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保护机制探索

发布时间：2017-06-30 17:00

  本文关键词：新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保护机制探索，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：艾滋病(HIV)流行已经严重威胁人类健康和社会稳定,它已造成了数千万人的死亡,仍有超过3000万的存活者忍受着艾滋病的折磨。而且,平均每天仍有约15000个新增感染者,但至今人们未研发出一种安全有效的艾滋病疫苗。由于艾滋病的主要传播渠道之一是通过性传播,而且肠道黏膜储存着大量的激活的CD4+T淋巴细胞.所以开发一种能够预防HIV感染,特别是预防黏膜感染的HIV疫苗,已成为一件迫切的科学问题。经过本实验室人员多年的努力,我们的研究团队已开发一种天坛株痘病毒(MVTT)载体疫苗初免/腺病毒载体疫苗加强免疫的黏膜免疫策略,这种疫苗策略在猕猴体内能够引起强烈的、稳定的、持续的细胞免疫。更为重要的是这种策略可以保护经黏膜途径感染的猴子,在急性感染期和慢性感染期对病毒的复制都有很好的免疫控制,并延缓了艾滋病的发展进程。然而我们并不清楚该疫苗的保护机制。本论文我试图阐述其可能的黏膜保护机制。首先我们发现该疫苗策略可以减少肠道CD4+T的丢失,与保护效果呈相关性。其次我们检测了细胞因子的表达,抗体的表达水平,并搜集了猴的肠道组织和肠道相关的淋巴组织,用HE染色,免疫组化染色,荧光定量的等检测方法试从形态学病理学,病毒学,免疫学等方法去深入探索其中的保护免疫机制。我们的实验数据表明,我们的该黏膜免疫策略可以减少肠道淋巴细胞的丢失,减少肠道表皮的破坏,减少SIV病毒的储存库,这些数据也表明我们的疫苗策略诱发了有效的黏膜免疫应答,并起到了良好的黏膜保护效果。我们的研究为进一步证明肠道黏膜在控制SIV感染中发挥重要的作用提供了强有力的数据支持,也将为以后研发更有效的黏膜疫苗奠定了理论基础和借鉴作用。
【关键词】：艾滋病 疫苗 黏膜 机制
【学位授予单位】：中国科学技术大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.91
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-21
• 1.1 人类免疫缺陷病毒(HIV)及艾滋病简介11-16
• 1.1.1 艾滋病的流行是全球公共卫生事业的巨大挑战11-12
• 1.1.2 HIV的起源与进化12-13
• 1.1.3 HIV/SIV的形态结构与基因组组成13-14
• 1.1.4 HIV感染机体和艾滋病的进展过程14-16
• 1.2 黏膜免疫疫苗的开发与HIV的预防与控制16-21
• 1.2.1 黏膜是HIV病毒感染的主要门户16-17
• 1.2.2 HIV通过黏膜侵入机体17-18
• 1.2.3 HIV入侵黏膜系统的危害18-19
• 1.2.4 艾滋病疫苗的研发现状19-20
• 1.2.5 本课题的工作-新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保护机制探索20-21
• 第2章 实验材料与方法21-41
• 2.1 痘病毒载体与腺病毒载体联合免疫21-22
• 2.1.1 实验试剂及材料21
• 2.1.2 恒河猴免疫的实验方法21-22
• 2.2 实时定量PCR检测血浆中SIV病毒载量22-25
• 2.2.1 实验试剂及材料22-23
• 2.2.2 分离猴血浆23
• 2.2.3 SIV血浆病毒基因组的提取23-24
• 2.2.4 RNA标准品的制备24
• 2.2.5 实时定量PCR检测血浆中SIV病毒载量24-25
• 2.3 酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-Γ因子的水平25-29
• 2.3.1 实验材料及试剂25-26
• 2.3.2 R10完全培养基的配置26
• 2.3.3 SIV多肽的溶解保存26
• 2.3.4 恒河猴血浆PBMC(Peripheral blood mononuclear cell)的分离和计数26-27
• 2.3.5 恒河猴淋巴结淋巴细胞的制备27
• 2.3.6 恒河猴血浆PBMC冻存27
• 2.3.7 ELISPOT检测IFN-γ分泌操作步骤27-29
• 2.3.8 ELISPOT结果分析方法29
• 2.4 流式分析细胞表型29-30
• 2.4.1 实验材料与试剂29
• 2.4.2 流式分析细胞表型操作步骤29-30
• 2.5 酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中SIV特异性的结合抗体30-32
• 2.5.1 实验材料及试剂30
• 2.5.2 SIVmac239病毒的扩增30
• 2.5.3 超速离心的方法纯化浓缩SIVmac23930-31
• 2.5.4 制备SIVmac239全病毒裂解液31
• 2.5.5 ELISA检测血浆中SIV特异性的结合抗体的操作31-32
• 2.6 胞内细胞因子染色法检测多功能T细胞32-33
• 2.6.1 实验仪器及材料32
• 2.6.2 所需试剂的配制32
• 2.6.3 胞内细胞因子染色操作步骤32-33
• 2.7 Luminex检测猴血清中细胞因子的表达33-34
• 2.7.1 实验材料及试剂33-34
• 2.7.2 Luminex操作步骤34
• 2.8 石蜡包埋和HE染色(hematoxylin-eosin staining)34-35
• 2.8.1 实验材料及试剂34
• 2.8.2 石蜡包埋和HE染色操作34-35
• 2.9 免疫组化35-37
• 2.9.1 实验材料及试剂35-36
• 2.9.2 免疫组化操作方法36-37
• 2.9.4 免疫组化注意事项37
• 2.10 组织中SIV整合基因的定量37-41
• 2.10.1 实验材料及试剂37-38
• 2.10.2 组织基因组提取38-39
• 2.10.3 DNA标准品的制备39
• 2.10.4 Q-PCR定量组织中SIV DNA病毒载量39-41
• 第3章 结果与分析41-65
• 3.1 我们的疫苗策略能够预防SIV的感染41-43
• 3.2 该疫苗产生的免疫应答降低了恒河猴体内的血浆病毒载量43-45
• 3.3 血液指标初步证明该疫苗能够控制肠道CD4+T细胞的丢失45-47
• 3.4 猴肠道组织及其相关淋巴结结构观察47-60
• 3.4.1 本文部分试验猴猴发病症状观察记录47
• 3.4.2 该疫苗能够减缓淋巴结的结构破坏47-51
• 3.4.3 该疫苗能够维持淋巴结中B细胞的正常分布51-53
• 3.4.4 该疫苗能够控制猕猴淋巴结中T细胞的丢失53-55
• 3.4.5 该疫苗能有效促进和维持淋巴滤泡内细胞增殖55-57
• 3.4.6 死于艾滋病的猕猴肠道结构变化的观察57-60
• 3.5 该疫苗可以降低SIV病毒储存库60-63
• 3.6 实验结果总结63-65
• 第4章 问题与讨论65-67
• 参考文献67-75
• 附录1 缩略词75
• 附录2 申明75
• 附录3 伦理申明75-77
• 致谢77-79
• 在学期间已发表或取得的其他取得的其他研究成果79

【共引文献】

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1 简丽;猿腺病毒6型和7型血清中和抗体在中国人群中的流行病学研究[D];重庆医科大学;2014年

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本文编号：502673