梅毒螺旋体假定蛋白Tp0693的表达及其在临床检测中的初步应用

发布时间：2017-07-08 01:05

  本文关键词：梅毒螺旋体假定蛋白Tp0693的表达及其在临床检测中的初步应用

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【摘要】：目的:构建梅毒螺旋体假定蛋白Tp0693的原核表达载体,并在大肠埃希菌中诱导表达,探讨其在梅毒临床血清学诊断中的价值,为发现新的Tp候诊抗原提供实验依据。方法:Tp0693基因序列从数据库Genbank中查取,设计上下游双引物,以Tp Nichols标准株DNA为模板,PCR扩增Tp0693基因片段;构建载体pET30a-Tp0693,经IPTG诱导,在E.coliBL21(DE3)菌中表达,纯化后包被于酶标板,建立ELISA法,检测各期梅毒血清(201例)、交叉血清(66例)和阴性血清(100例),用统计学方法与TPPA、RPR法检测结果进行比较,初步评价Tp0693-ELISA在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果:(1)PCR扩增出与目的基因大小相符的片段,经双酶切、测序鉴定证实插入重组质粒的片段为目的基因片段Tp0693;(2)SDS-PAGE结果显示诱导表达的蛋白相对分子量约为50kDa,WB检测显示目的蛋白Tp0693与抗His抗体和梅毒阳性血清有特异性免疫反应;(3)Tp0693-ELISA测定的S/CO值从低到高分组,统计发现各组TPPA和RPR检测阳性率随S/CO值增加而增加。当S/CO≥3.001时,TPPA和RPR检测阳性率,分别达到100%和79.56%,用统计软件SPSS17.0进行趋势性X2检验,P值都0.01;(4)以Tp0693-ELISA测定的S/CO值为检测变量,TPPA为阴阳性判断金标准,做ROC曲线,曲线下面积0.990,说明诊断效果好;(5)以S/CO值2.721为阴阳性评判界点,此时Tp0693-ELISA检测特异性为100%,敏感性为91%,与TPPA法检测结果一致性好,比RPR法敏感性高;(6)用统计软件SPSS17.0对梅毒阳性标本Tp0693-ELISA测定S/CO值和TPPA、RPR检测滴度进行相关性统计分析,Tp0693-ELISA测定S/CO值与TPPA检测滴度的相关系数为0.116,P0.05,与RPR检测滴度的相关系数为0.176,P0.05,说明梅毒阳性标本Tp0693-ELISA法S/CO值与TPPA、RPR检测滴度不相关;(7)以S/CO值从1.368到2.721作为Tp0693-ELISA法的检测灰区,统计发现梅毒标本中,灰区标本在隐性梅毒中比例较高,为14.8%(16/108);交叉血清中,灰区标本在伤寒和风湿病中比例较高,分别为80%(8/10)和55.2%(16/29)。TPPA、RPR检测滴度从高到低在灰区都有分布。结论:基于p ET30a-Tp0693重组表达蛋白建立的Tp0693-ELISA具有高度特异性、较好的敏感性,Tp0693可望成为Tp候选诊断抗原。
【关键词】：梅毒螺旋体 Tp0693 血清学诊断 ELISA
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R759.1;R446.6
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 主要缩略语英文索引10-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 实验材料14-16
• 第3章 实验方法16-30
• 第4章 实验结果30-44
• 第5章 讨论44-46
• 第6章 结论46-48
• 参考文献48-50
• 附录50-52
• 文献综述 梅毒实验室诊断方法及其应用进展52-65
• 参考文献60-65
• 硕士期间发表论文情况65-67
• 致谢67

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本文编号：532459