日本血吸虫抗原SjE16.7激活巨噬细胞的表型鉴定与功能研究

发布时间：2017-07-19 23:01

  本文关键词：日本血吸虫抗原SjE16.7激活巨噬细胞的表型鉴定与功能研究

  更多相关文章： SjE16.7 巨噬细胞 血吸虫 免疫反应

【摘要】：日本血吸虫病是我国的重大传染病之一。血吸虫虫卵所诱导的虫卵肉芽肿是血吸虫病的主要病理表现,其形成过程与宿主免疫反应密切相关。研究血吸虫虫卵诱导的免疫反应的过程与机制,对血吸虫病的防治具有重要意义。SjE16.7为日本血吸虫虫卵特异性抗原。以往的研究发现,SjE16.7对固有免疫细胞具激活作用,但其具体的机制尚不十分明确。本课题以巨噬细胞为研究对象,对SjE16.7激活巨噬细胞的表型与功能进行了深入探索。体外迁移实验的结果表明,SjE16.7可显著促进巨噬细胞的趋化,并且SjE16.7特异性抗体可明显抑制血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)所诱导的巨噬细胞趋化,提示SjE16.7在血吸虫虫卵招募免疫细胞的过程中起着重要作用。实时定量PCR与ELISA检测证实,SjE16.7刺激巨噬细胞,使其产生和分泌细胞因子(IL-10,IL-12,IL-6,TNF-α)的能力明显增加。以流式细胞术分析巨噬细胞表面标志后发现,SjE16.7可诱导巨噬细胞表面MHCⅡ类分子的表达显著增高,而巨噬细胞M1和M2a极化相关分子CD16/32与CD206的表达并无明显变化。应用Western Blot检测SjE16.7刺激巨噬细胞后细胞内信号通路结果表明,SjE16.7可显著激活细胞内JNK与NF-κB信号通路。SjE16.7诱导的巨噬细胞活化可被酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein)所抑制,提示SjE16.7可能通过酪氨酸蛋白激酶相关受体发挥作用。在体内实验中,利用小鼠血吸虫虫卵肺肉芽肿模型,我们发现SjE16.7抗体可有效抑制虫卵肉芽肿的形成,使肉芽肿体积减小、炎症细胞浸润减少。本研究结果表明,SjE16.7是血吸虫虫卵中的一个重要致病因子,在虫卵诱导的免疫病理反应中起着重要作用。
【关键词】：SjE16.7 巨噬细胞 血吸虫 免疫反应
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R532.21
【目录】：

• 论文创新点6-7
• 摘要7-8
• ABSTRACT8-11
• 中英文对照11-13
• 绪论13-15
• 第1章 SJE16.7 在巨噬细胞活化中的作用15-42
• 1.1 引言15-16
• 1.2 实验材料16-22
• 1.2.1 实验动物、细胞16
• 1.2.2 实验试剂及其配制16-21
• 1.2.3 主要实验器材及仪器21-22
• 1.3 实验方法22-31
• 1.3.1 固体培养基22
• 1.3.2 GST-SjE16.7 的表达与纯化22-23
• 1.3.3 His-SjE16.7 的表达与纯化23-24
• 1.3.4 巨噬细胞Transwell实验24-25
• 1.3.5 BCA测定蛋白浓度25
• 1.3.6 细胞复苏25
• 1.3.7 细胞冻存25-26
• 1.3.8 细胞计数26
• 1.3.9 小鼠成纤维细胞（L929）培养26
• 1.3.10 骨髓巨噬细胞的提取与培养26-27
• 1.3.11 抗原刺激巨噬细胞27
• 1.3.12 骨髓巨噬细胞的mRNA的提取及Real-time PCR检测被刺激骨髓巨噬细胞的基因表达水平27-29
• 1.3.13 ELISA检测抗原刺激骨髓巨噬细胞的免疫反应29
• 1.3.14 Western检测抗原刺激骨髓巨噬细胞蛋白表达水平29-30
• 1.3.15 流式检测技术30
• 1.3.16 Genistein抑制实验30
• 1.3.17 数据统计与分析30-31
• 1.4 实验结果31-39
• 1.4.1 SjE16.7 诱导巨噬细胞移行31-33
• 1.4.2 SjE16.7 刺激巨噬细胞分泌细胞因子33-34
• 1.4.3 抗原在巨噬细胞的极化方面的免疫学研究34-36
• 1.4.4 SjE16.7 活化巨噬细胞的信号通路36-37
• 1.4.5 Genistein抑制巨噬细胞的分泌IL-1037-39
• 1.5 讨论39-42
• 第2章 SJE16.7 促进日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成和发展42-54
• 2.1 引言42
• 2.2 实验材料42-46
• 2.2.1 实验动物42
• 2.2.2 实验试剂及其配制42-44
• 2.2.3 主要实验器材及仪器44-46
• 2.3 实验方法46-49
• 2.3.1 抗原乳化46
• 2.3.2 小鼠日本血吸虫模型的构建与虫卵的提取46-47
• 2.3.3 SEA的制备47
• 2.3.4 His-SjE16.7 小鼠多克隆抗体的制备47
• 2.3.5 多克隆抗体的纯化47-48
• 2.3.6 ELISA检测抗原刺激骨髓巨噬细胞的IL-1048
• 2.3.7 小鼠肺虫卵肉芽肿模型的构建48-49
• 2.3.8 免疫组化实验49
• 2.3.9 数据分析与统计49
• 2.4 实验结果49-52
• 2.4.1 SjE16.7 活化巨噬细胞与SEA趋势不完全相同49-50
• 2.4.2 SjE16.7 在虫卵肉芽肿的形成中的作用50-52
• 2.5 讨论52-54
• 总结54-56
• 参考文献56-59
• 综述 巨噬细胞在血吸虫感染中的作用59-69
• 参考文献66-69
• 致谢69-71
• 已发表论文71

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