TLR9-MyD88信号通路与尖锐湿疣相关性的研究

发布时间：2017-08-04 12:25

  本文关键词：TLR9-MyD88信号通路与尖锐湿疣相关性的研究

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【摘要】：目的:本研究我们将观察TLR9及其My D88依赖途径中重要的信号转导分子如My D88、IRF-7在不同预后尖锐湿疣患者皮损局部的表达情况。探讨TLR9-My D88信号通路在尖锐湿疣发病机制中的作用以及它们与尖锐湿疣发生、发展的关系。研究结果以期为尖锐湿疣的预防、治疗提供新的策略。方法:根据纳入和排除标准选取符合条件的15例初发和15例复发尖锐湿疣患者皮损作为实验组,12例健康人正常包皮作为对照组。实验组患者皮损在常规消毒铺巾后,用2%利多卡因作局部浸润麻醉,切取疣体组织。对照组包皮组织是经包皮环切术取得。所有样本组织均经10%中性福尔马林固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤制成蜡块,切片后采用免疫组织化学法在蛋白水平上分别检测尖锐湿疣初发组、复发组及正常对照组组织中TLR 9、My D88、IRF-7的蛋白表达情况。采用FFPE样品RNA分离试剂盒提取纯化蜡块组织中的RNA,然后用实时荧光定量PCR法在基因水平上分别检测尖锐湿疣初发组、复发组及正常对照组组织中TLR9、My D88、IRF-7的m RNA表达情况。所有实验数据应用SPSS20.0软件包进行统计描述与分析。结果:1、免疫组化结果:TLR9、My D88、IRF-7在正常对照组及尖锐湿疣初发组、复发组均有不同程度表达。TLR9在对照组弱阳性表达于基底层,在尖锐湿疣初发组,TLR9主要集中于表皮基底层、棘层、颗粒层,呈阳性或强阳性表达,在尖锐湿疣复发组的表皮全层呈阳性或强阳性表达。My D88在正常对照组呈弱阳性表达,且主要集中在基底层胞浆;在初发组的棘层、颗粒层、空泡细胞周围、角质层呈强阳性表达,基底层呈中等强度阳性表达;在复发组的基底层、棘层呈强阳性表达,颗粒层呈中等强度表达。IRF-7在正常包皮组织中主要表达于基底层胞浆,呈弱阳性表达;在初发组的棘层、角质层呈强阳性表达,基底层、颗粒层呈中等强度阳性表达;在复发组CA皮损的棘层、颗粒层、角质层呈强阳性表达,基底层呈中等强度表达。统计分析结果显示:在蛋白水平上,TLR9、My D88、IRF-7在三组中的表达均有显著差异(P0.001)。组间比较显示,TLR9、My D88、IRF-7在初发组及复发组的表达均显著高于对照组(P0.05),但在初发组与复发组的表达差异无统计学意义(P0.05)。Spearman相关系数分析显示:TLR9与My D88、TLR9与IRF-7、My D88与IRF-7均成正相关关系,而且相关程度较高(rs分别为0.907,0.916,0.876)。2、实时荧光定量PCR的结果:用Amoy Dx RNA试剂盒对FFPE样本进行抽提的RNA浓度在58ug/ml-118ug/ml之间,OD260/OD230比值与OD260/OD280比值均在1.8~2.0之间,1%琼脂糖凝胶电泳分析显示所提取的RNA完整性好。内参基因β-actin、目的基因TLR9、My D88、IRF-7荧光定量PCR扩增曲线呈S型,基线平滑。β-actin、TLR9、My D88、IRF-7的扩增产物的熔解曲线呈单一峰,峰的形状较锐利,系特征峰,PCR扩增为特异性扩增。统计分析结果显示:β-actin在正常对照组、初发组、复发组三组的表达相对恒定,三组间的表达差异无统计学意义(P0.05)。在基因水平上,TLR9、My D88、IRF-7分别在对照组、初发组、复发组的表达量有差异,在对照组的表达均显著低于初发组及复发组,差异具有统计学意义(P0.05),但初发组与复发组的表达量无统计学差异。(P0.05)。Pearson相关系数分析显示:TLR9与My D88、TLR9与IRF-7、My D88与IRF-7均成正相关关系,而且有较高的相关性(r分别为0.868,0.872,0.781)。结论:1、用Amoy Dx RNA试剂盒对FFPE样本进行抽提的RNA浓度和纯度均可,完整性好,质量较理想。2、β-actin在正常对照组、初发组、复发组中的表达相对稳定,β-actin可作为内参基因以检测TLR9、My D88、IRF-7等目的基因在三组之间的表达情况。3、不论在蛋白水平还是在基因水平,TLR9、My D88、IRF-7在尖锐湿疣患者局部皮损中均异常表达,且表达程度均显著高于正常对照组。提示高表达的TLR9可能作为HPV的识别受体,TLR9可能识别HPV病毒中的Cp G-DNA序列并激活My D88依赖途径,引发信号转导,激活IRF7等转录因子,调节干扰素的表达,参与机体抗HPV的局部免疫反应。但在初发组和复发组的表达无明显差异,提示TLR9、My D88、IRF-7可能与尖锐湿疣的病程、预后无明显关系,也可能与持续感染的HPV存在免疫逃逸而不能进一步活化增强信号转导途径有关,还可能与标本量较少有关。4、尖锐湿疣局部皮损中TLR9、My D88、IRF-7的表达异常,可能与机体抗HPV免疫应答有密切关系,My D88依赖的信号通路可能在CA的发病中起着重要作用,但具体的因果关系及确切的免疫学机制尚未完全清楚,有待进一步研究。
【关键词】：尖锐湿疣 Toll样受体9 髓系分化因子88 干扰素调节因子7 免疫组化 实时荧光定量PCR
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R752.53
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-18
• 材料与方法18-28
• 结果28-40
• 讨论40-45
• 结论45-46
• 参考文献46-52
• 英汉缩略词对照表52-53
• 致谢53-55
• Toll样受体与尖锐湿疣关系的研究进展(综述)55-70
• 参考文献65-70

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1 刘爱美;TLR9-MyD88信号通路与尖锐湿疣相关性的研究[D];西南医科大学;2016年

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本文编号：619577