顺铂诱导HBV再激活的分子机制研究

发布时间：2017-08-07 15:38

  本文关键词：顺铂诱导HBV再激活的分子机制研究

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【摘要】：据世界卫生组织报道,全世界目前约有20亿人曾感染过乙肝病毒,其中约有4亿成为乙肝表面抗原阳性的慢性携带者,而其中的75%的慢性携带者是中国人;中国每年因乙肝病毒感染致死的近50万人,居全球首位。在我国,乙型肝炎病毒感染是诱发慢性肝炎,肝硬化和肝癌的重要危险因子。据统计,HBV再激活现象在无症状携带者和慢性乙肝患者中极少发生,但如果接受免疫抑制剂或或化疗药物治疗时,会有一定几率活化处于静息状态或是低复制状态的乙肝病毒.大量瞬时活化的乙肝病毒会诱发患者急性肝炎、急性肝衰竭甚至爆发性肝衰竭,使化疗中断,耽误肿瘤患者的正常治疗和预后,严重时可能危及患者生命。2011年,恶性肿瘤上升为人类死亡病因的第3位,其发病率和致死人数逐年上升。2011年,临床统计HBV再激活的发病率为14%-66%,HBV再激活已经成为严重威胁中国人健康的重要公共卫生问题。顺铂等化疗药物可以诱导HBV再激活的现象已被国内外多项临床试验证实,但是其诱导乙肝病毒复制再激活的分子机制至今尚不清楚。目前解释该现象的机制有两种:第一种,化疗药物如顺铂具有很强的免疫抑制能力,通过抑制机体的免疫系统,使乙肝病毒免疫逃逸,乙肝病毒大量复制诱发HBV再激活。大多数学者认同这一机制。第二种,化疗药物顺铂可以直接促进乙肝病毒复制。目前国内外关于顺铂直接促进hbv再激活以及相关分子机制的研究报道还是空白,本课题设计就是针对这一空白,研究探讨顺铂直接促进hbv复制的相关的分子通路。我们首先在体外成功构建了环化自连的hbvdna(circμlarizedhbvdna)并证实:无论在体内还是体外,环化的hbvdna的感染效率和复制水平均明显优于线性的hbvdna(p0.05)。使用环化的hbvdna构建的hbv水动力小鼠模型,并使用回交传代法提高已有的c57hbv转基因小鼠的遗传稳定性,为下一步的实验研究提供hbv高效复制的动物模型。其次选用乙肝病毒稳定表达的c57hbv转基因小鼠模型和前期构建的hbv水动力小鼠模型,通过elisa、real-timepcr、western-blot、southern-blot、ihc和chip等实验进行hbv再激活的体内验证实验,检测顺铂是否可以在体内诱导hbv再激活。实验研究顺铂诱导hbv再激活的分子机制:首先,筛选与hbv再激活相关的hbv启动子和肝富集转录因子;其次,选取其中代表性的转录因子pgc-1α和hnf-4α进行体内外验证;通过chip等实验证明pgc-1α、hnf-4α在顺铂诱导hbv复制过程中发挥重要作用;进一步构建pgc-1α和hnf-4α的sirna,体内外反向验证pgc-1α和hnf-4α是否为顺铂诱导hbv再激活的关键因子;同时通过elisa、real-timepcr、western-blot等实验筛选内质网应激相关因子,探讨内质网应激与hbv再激活的相关性及其关键因子。实验证实顺铂一方面可以通过直接上调hbv复制相关转录因子pgc-1α和hnf-4α的表达,增强hbv核心启动子活性,继而在转录水平上调hbv的复制;另一方面可以引起内质网应激,UPR(未折叠蛋白反应)诱发PGC-1α表达上调,间接上调HBV复制。结论:化疗药物顺铂可以在体内外直接增强HBV复制与转录从而诱导HBV再激活。其分子通路可能有两条:1.PGC-1α和HNF-4α通路,肝富集转录因子PGC-1α和HNF-4α作为共激活因子,可以共同结合于HBV DNA增强子Ⅰ和增强子Ⅱ上,顺铂可以直接上调肝富集转录因子PGC-1α和HNF-4α的表达,直接增强乙肝病毒的复制,引起HBV再激活;2.顺铂可以引起内质网应激(ERS),内质网应激可以诱导PGC-1α表达上调,间接上调HBV复制。通过对顺铂诱导HBV再激活分子机制的研究,我们可以找到阻断该现象的药物靶点,预防用药降低临床HBV再激活的发生率,改善肿瘤患者的预后和生存质量。
【关键词】：顺铂 乙肝病毒 病毒复制 HBV再激活
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一部分 乙型肝炎病毒稳定复制小鼠模型的构建，保种及检测16-34
• 1 材料与方法16-25
• 2 结果25-30
• 3 讨论30-34
• 第二部分HNF-4α、PGC-1α 在顺铂诱导HBV再激活机制中的重要作用34-52
• 1 材料与方法34-45
• 2 结果45-48
• 3 讨论48-52
• 第三部分 沉默HNF-4α、PGC-1α 抑制顺铂诱导HBV再激活52-69
• 1 材料与方法52-60
• 2 结果60-67
• 3 讨论67-69
• 第四部分 内质网应激（ERS）上调PGC-1α，间接辅助顺铂诱导HBV再激活69-79
• 1 材料与方法69-72
• 2 结果72-76
• 3 讨论76-79
• 参考文献79-83
• 全文总结83-85
• 文献综述85-94
• 参考文献91-94
• 致谢94-95
• 攻读学位期间发表的学术论文95-96
• 攻读硕士期间参加的学术会议96

【参考文献】

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1 María Luisa Manzano-Alonso;Gregorio Castellano-Tortajada;;Reactivation of hepatitis B virus infection after cytotoxic chemotherapy or immunosuppressive therapy[J];World Journal of Gastroenterology;2011年12期

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本文编号：635401