白念珠菌性脓毒症中HMGB1的表达及其作用的临床和动物实验研究

发布时间：2017-08-12 14:33

  本文关键词：白念珠菌性脓毒症中HMGB1的表达及其作用的临床和动物实验研究

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【摘要】：目的:侵袭性真菌感染已成为严重威胁人类健康的疾病,在细菌性脓毒症中起着重要作用的晚期炎症介质---高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是否也在侵袭性真菌感染中发挥着重要作用目前尚不清楚。而白念珠菌又是侵袭性真菌感染的主要病原体。本研究拟进行白念珠菌性脓毒症的临床和动物实验,研究HMGB1的表达情况,以期探讨HMGB1在侵袭性白念珠菌感染中的作用,为侵袭性白念珠菌感染的防治提供新的治疗靶点。方法:1.临床收集白念珠菌性脓毒症患者的外周血,用ELISA和q RT-PCR检测HMGB1、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及HMGB1 m RNA的表达,并与临床指标进行相关性分析。2.构建侵袭性白念珠菌感染动物模型,实验分正常组、免疫抑制组、侵袭性白念珠菌感染组和侵袭性白念珠菌感染+丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)组,分别于感染后1、3、5和7d处死小鼠,取外周血检测肝肾功和C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)等指标以明确小鼠的病情严重程度,取肺、肝和肾组织进行HE染色观察各组织损伤情况,ELISA检测外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的含量,q RT-PCR检测小鼠外周血、肺、肝和肾组织中HMGB1 m RNA的表达,Western blot和免疫组化检测肺、肝和肾组织中HMGB1的表达。结果:1.白念珠菌性脓毒症患者外周血q RT-PCR结果显示,伴白念珠菌感染的严重脓毒症患者、不伴真菌感染的严重脓毒症患者和脓毒症患者外周血HMGB1 m RNA的表达均高于正常人(P0.01),而伴白念珠菌感染和不伴真菌感染的严重脓毒症患者又高于一般脓毒症患者(P0.05或0.01);但伴白念珠菌感染的严重脓毒症患者和不伴真菌感染的严重脓毒症患者外周血HMGB1 m RNA的表达没有显著性差异。2.白念珠菌性脓毒症患者外周血ELISA结果显示,伴白念珠菌感染的严重脓毒症患者、不伴真菌感染的严重脓毒症患者和脓毒症患者血清中HMGB1、TNF-α和IL-6的表达均高于正常人;而伴白念珠菌感染和不伴真菌感染的严重脓毒症患者又高于一般脓毒症患者;且伴白念珠菌感染的严重脓毒症患者血清中HMGB1和TNF-α的表达明显高于不伴真菌感染的严重脓毒症患者,但伴白念珠菌感染的严重脓毒症患者和不伴真菌感染的严重脓毒症患者血清中IL-6的表达没有显著性差异。3.Spearman相关分析显示:白念珠菌性脓毒症患者外周血HMGB1与降钙素原(procalcitonin,PCT)、CRP和1,3-β-D-葡聚糖(1,3-β-D-glucan,BDG)成正相关(r分别为0.530、0.541、0.816,P0.05或0.01),与白细胞(white blood cell,WBC)无相关(r为0.093,P0.05)。4.小鼠腹腔注射环磷酰胺后,血液中的白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板均明显减少,其中以白细胞减少最为明显,表明免疫抑制小鼠模型构建成功。5根据不同浓度小鼠的生存曲线,本实验选取的侵袭性白念珠菌感染的最适浓度为2×105个/ml。6.肺、肝和肾组织培养及病理结果显示:肺、肝和肾组织中均有白念珠菌生长,表明侵袭性白念珠菌感染模型构建成功。7.与正常组相比,免疫抑制组、侵袭性白念珠菌感染组和EP组小鼠在免疫抑制后第4d开始体重明显下降(P0.05);与免疫抑制组相比,侵袭性白念珠菌感染组和EP组小鼠在感染后第2d开始体重明显下降(P0.05);与EP组相比,侵袭性白念珠菌感染组小鼠在感染后第3d开始体重明显下降(P0.05)。8.侵袭性白念珠菌感染组小鼠的死亡率为33.33%,EP组小鼠的死亡率为13.33%;与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP能显著减少小鼠的死亡率,差异有统计学意义(P0.05)。9.生化和病理结果显示,与正常组和免疫抑制组相比,侵袭性白念珠菌感染组小鼠的肺、肝和肾组织明显受损,CRP明显升高;而与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP组小鼠肺、肝和肾组织受损程度明显减轻,CRP明显降低。10.外周血、肺、肝和肾组织q RT-PCR结果显示,与正常组和免疫抑制组相比,侵袭性白念珠菌感染组和EP组小鼠的外周血、肺、肝和肾组织中HMGB1 m RNA的表达均明显增加(P0.05或0.01);而与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP组小鼠在感染后3d开始HMGB1m RNA的表达明显减少(P0.01)。11.肺、肝和肾组织Western blot结果显示:白念珠菌感染后,侵袭性白念珠菌感染组和EP组小鼠肺、肝和肾组织中HMGB1的表达明显增加;与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP能显著抑制HMGB1的表达。12.肺、肝和肾组织免疫组化结果显示,白念珠菌感染后,侵袭性白念珠菌感染组小鼠肺组织HMGB1的表达明显增加,主要集中在细胞核内;肝组织细胞核内HMGB1的表达明显增加,同时随着感染天数的延长,肝细胞胞浆中HMGB1的表达也明显增高;肾组织皮质中胞核和胞浆中HMGB1的表达均明显增加。而与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP不仅能明显抑制胞核中HMGB1的表达,也能明显抑制HMGB1从胞核释放到胞浆中。13.外周血ELISA结果显示,侵袭性白念珠菌感染组和EP组小鼠外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的表达明显增高(P0.01);与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP组小鼠外周血HMGB1、TNF-α和IL-6的表达明显降低(P0.05或0.01)。结论:1.白念珠菌性脓毒症患者外周血HMGB1蛋白水平明显高于不伴真菌感染的严重脓毒症患者,但两者外周血HMGB1 m RNA的表达没有显著性差异。目前HMGB1在白念珠菌性脓毒症中的研究还未见报道,本实验收集到的样本量少,HMGB1在白念珠菌性脓毒症中的作用还需进一步研究。2.白念珠菌性脓毒症患者外周血HMGB1与PCT、CRP和BDG成正相关。根据其他细菌脓毒症和本实验研究结果,我们猜测HMGB1结合临床上不同的指标,有助于区别细菌脓毒症和真菌脓毒症的诊断。但本实验收集到的样本量少,这一猜想还有待进一步证明。3.本实验构建侵袭性白念珠菌感染动物模型选取的最适感染浓度为2×105个/ml,组织培养和组织病理学方法均证实侵袭性白念珠菌感染动物模型构建成功。4.侵袭性白念珠菌感染组小鼠外周血、肺、肝和肾组织中HMGB1m RNA和蛋白表达明显增高,而与侵袭性白念珠菌感染组相比,EP能明显抑制HMGB1的表达和释放,减轻肺、肝和肾组织的损伤程度,减少小鼠死亡率,表明HMGB1抑制剂可能为侵袭性白念珠菌感染的治疗提供新的靶点。
【关键词】：高迁移率族蛋白B1 丙酮酸乙酯 白念珠菌 脓毒症
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R519.3;R459.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-18
• 前言18-20
• 第一部分 HMGB1在白念珠菌性脓毒症患者外周血中的表达20-39
• 1 材料20-22
• 2 方法22-26
• 3 结果26-36
• 4 讨论36-39
• 第二部分 HMGB1在侵袭性白念珠菌感染动物模型中的表达39-73
• 1 材料39-41
• 2 方法41-48
• 3 结果48-70
• 4 讨论70-73
• 参考文献73-79
• 全文总结79-80
• 文献综述80-90
• 参考文献87-90
• 致谢90-91
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文91

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：662098