博尔纳病病毒感染人少突胶质细胞差异microRNA表达和生物信息学分析

发布时间：2017-08-15 12:10

  本文关键词：博尔纳病病毒感染人少突胶质细胞差异microRNA表达和生物信息学分析

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【摘要】：背景:博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是引起博尔纳病的病原体,最先被发现于德国博尔纳镇的军马中,引起急性脑脊髓非化脓性炎症的地方性流行病。BDV是一种单股负链、非节段性、非细胞溶性的非逆转录病毒,具有强烈的噬神经性。BDV能感染大部分温血动物,包括哺乳动物和鸟类等。虽然有关BDV在人类的自然感染和致病还缺乏直接证据,也未有爆发流行,但是有文献对精神病人的流行病学调查显示BDV有较高的阳性率,而且体外实验已经证明BDV确能感染人神经细胞,并对其增殖凋亡、代谢、蛋白组学和信号通路等产生明显影响。但是BDV对于人神经系统的miRNA研究较为少见,其中人源病毒株Hu-H1对于人神经系统及神经胶质细胞的研究也鲜有报道。利用mi RNA芯片技术和RT-qPCR实验对miRNA进行高通量筛选鉴定,结合生物信息学分析,提出miRNA与BDV感染新的假说和课题方向,增强对BDV感染的认识。目的:本实验从miRNA的基本点出发,旨在探讨人源BDV病毒株Hu-H1干扰OL细胞miRNA的差异表达和生物学功能,为进一步BDV致病病理机制提供新支点。方法:1.复苏本实验保存的bdv长期感染的ol细胞,提取病毒液测定其滴度;扩增本实验保存的pegfp-n1-p40和pegfp-n1-p24质粒,用于后续细胞感染。2.复苏本实验保存的无感染正常ol细胞,感染bdv-hu-h1病毒,与对照组ol细胞同时培养14天后,测定其感染率并提取rna;扩增和转染本实验保存的pegfp-n1-p40和pegfp-n1-p24质粒,转染正常的ol细胞后提取rna。实验分为ol组、ol/bdv组、ol/p40组、ol/p24组和ol/con组。3.提取上述各组细胞rna进行mirna芯片筛选实验,将ol和ol/bdv组的差异mirnas进行生物信息学分析。4.将芯片筛选的差异mirna进行实时荧光定量pcr(rt-qpcr)实验验证,从而确定具体差异。结果:1.病毒感染ol细胞14天后达到完全感染;质粒成功转染ol细胞并且p24和p40蛋白正常表达。2.mirna芯片在正常的ol细胞和ol/bdv细胞中筛选出10个差异mirna,其中4个上调(mirna-1290,mirna-1908,mirna-424-5p,mirna-146a-5p),6个下调(mirna-296-3p,mirna-1244,mirna-3676-3p,mirna-4521,mirna-4433-3p,mirna-7-5p)。3.将上述差异mirna进行生物信息学(pathway和go)分析和差异miRNA靶基因的预测,分析对BDV对OL细胞相关信号通路和生物学功能的干扰和影响。4.RT-q PCR实验将上述差异miRNA进一步验证,miRNA-1290,miRNA-1908,miRNA-424-5p,miRNA-146a-5p,mi RNA-296-3p,miRNA-3676-3p,miRNA-7-5p等7个显著下调(P0.05)。miRNA-1244和miRNA-4521没有显著性差异(P0.05)。结论:1.人源BDV病毒株Hu-H1可以干扰人少突胶质细胞(OL细胞)某些miRNAs的正常表达。2.根据生物信息学的分析和对差异mi RNAs靶基因的预测,miRNA参与到BDV感染对宿主的致病过程。3.推测miRNA-424-p,miRNA-7-5p和mi RNA-296-3p可能参与到BDV感染宿主和细胞的增殖、分化、凋亡等生物学过程;miRNA-146a可能参与BDV感染损害宿主学习记忆功能的过程。
【关键词】：博尔纳病病毒 人少突胶质细胞 miRNAs 生物信息学 RT-qPCR
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R511
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-18
• 参考文献15-18
• 1 材料18-20
• 2 方法20-31
• 3 结果31-42
• 4 讨论42-45
• 全文总结45-46
• 参考文献46-49
• 文献综述49-58
• 参考文献54-58
• 致谢58-59
• 硕士期间发表的论文59

【参考文献】

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1 Xiang-Dong Fu;;Non-coding RNA: a new frontier in regulatory biology[J];National Science Review;2014年02期

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本文编号：678073