日本血吸虫感染T细胞缺陷型小鼠诱导肝虫卵肉芽肿研究

发布时间：2017-08-16 00:17

  本文关键词：日本血吸虫感染T细胞缺陷型小鼠诱导肝虫卵肉芽肿研究

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【摘要】：[目的]利用T细胞缺陷型BALB/c裸鼠建立日本血吸虫病动物模型,研究T细胞缺失后血吸虫感染不同时间点肝脏病理变化和肝纤维化程度;研究T细胞缺失后B细胞及MDSC在血吸虫感染不同时间点的增殖水平以及与肝虫卵肉芽肿和纤维化病变的关系。从而评价T细胞在小鼠日本血吸虫病肝纤维化过程中的作用,为日本血吸虫病肝纤维化的防治提供新思路和新途径。[方法]将80只BALB/c裸鼠随机分为8组(0w、2w、4w、6w、8w、10w、12w、16w),用日本血吸虫尾蚴(18±2条/只),皮肤敷贴感染,于不同时间点取血、脾脏、骨髓和肝脏组织进行试验。HE和Masson染色观察BALB/c裸鼠肝组织病理变化;免疫组化检测肝组织中Ig G和Ig E水平;ELISA检测血清的Ig G和Ig E水平;化学发光法检测血清中透明质酸(HA)、三型前胶原N端肽(PⅢP N-P)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)的表达水平;FCM分析肝脏、脾脏、血液和骨髓中B细胞(CD19+细胞)与MDSCs(D11b+Gr-1+细胞)的增殖水平。[结果]BALB/c裸鼠感染日本血吸虫后,肝组织在不同时间点出现不同程度的炎症反应。感染早期(2w~4w):肉眼观肝脏肿大,质软,无虫卵颗粒状结节;HE染色可见肝组织出现以为分叶核细胞主的炎症细胞浸润及胶原蛋白含量的增加。虫卵肉芽肿形成期(4w~8w):肉眼可见肝脏颜色变深、肿大、质地变硬,表面有虫卵颗粒状结节;HE染色可见大量的分叶核细胞、多核巨细胞及泡沫细胞浸润为主的炎症细胞浸润和虫卵肉芽肿形成;Masson染色可见肝组织胶原蛋白含量显著性增加,门管区和肝小叶有胶原蛋白沉积,向肝纤维化病变转化。慢性纤维化早期(8w~12w):肉眼可见肝脏呈深褐色,质硬,表面大量颗粒状结节;HE染色可见大量炎性细胞浸润与虫卵结节;Masson组织染色可见肝纤维化病灶与大量胶原蛋白沉积。慢性纤维化晚期(12w~16w):与感染8w~12w比较,肝脏呈褐色,颜色变浅,质地变软,颗粒状结节减少;HE染色可见肝脏虫卵结节开始液化并形成空洞。血清ELISA和肝组织免疫组化揭示:Ig E在正常对照组与感染组之间均未检测到。化学发光技术检测血清结果表明:HA含量在裸鼠感染组第6w~12w显著性升高(P0.05),第10w为峰值(3830.50),其它感染组与对照组比较无显著性差异;PⅢP N-P、LN、Ⅳ-C的含量在各组间无统计学意义(P0.05);与日本血吸虫感染正常的BALB/c小鼠比较,HA、PⅢP N-P、LN及Ⅳ-C的含量均显著性低于裸鼠,(P0.05)。FCM结果显示:骨髓中,MDSCs(CD11b+Gr-1+细胞)比率在第4w、8w、16w显著性升高,(P0.05);血液中,感染组MDSCs比率均高于对照组,(P0.05);肝脏中,MDSCs在感染第2w~8w升高,但无显著性差异,而第10w~16w则显著性低于正常对照组,(P0.05);脾脏中,MDSCs在感染第8w显著性升高,而第10w显著性降低,(P0.05)。对B细胞检测显示:B细胞比例仅在血吸虫感染第2w的骨髓中显著性升高,(P0.05),其它感染组均显著性低于正常对照组,(P0.05),在肝脏和脾脏中,除感染第2w外,其它各感染组均显著性下降,其中感染组肝组织第4w、6w、10w、12w、16w与正常组比较具有极显著性差异,(P0.01);在血液中,感染组均显著性降低于正常对照组,有统计学意义,(P0.05)。[结论](1)T细胞缺失的裸鼠感染日本血吸虫后仍可形成肝虫卵肉芽肿及纤维化病,说明T细胞可能不是形成肝脏免疫病理变化的唯一重要的免疫细胞。(2)在肝虫卵肉芽肿形成中发现大量的分叶核细胞、多核巨细胞及泡沫细胞浸润,说明固有免疫细胞参与了炎症反应和虫卵肉芽肿的形成。
【关键词】：日本血吸虫病 虫卵肉芽肿 裸鼠 B细胞
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R532.21
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 常用的英文缩写13-17
• 第1章 绪论17-20
• 第2章 实验材料20-23
• 2.1 主要仪器设备及材料20-21
• 2.2 主要实验试剂21-23
• 第3章 实验方法步骤23-30
• 3.1 购建Balb/c裸鼠日本血吸虫病实验动物模型23
• 3.2 组织病理学检测23-24
• 3.3 化学发光法检测血清中肝纤维化指标24-25
• 3.4 流式细胞术测定CD11b_+Gr-1_+、CD19_+细胞数量25-27
• 3.5 ELISA检测IgE抗体27-28
• 3.6 免疫组织化学法检测感染小鼠肝组织中Ig E水平28-29
• 3.7 统计学方法处理数据29-30
• 第4章 实验结果30-52
• 4.1 实验动物体征与死亡情况30
• 4.2 肝脏病理组织学改变30-35
• 4.3 FCM测定血吸虫感染组MDSC和B细胞比率35-45
• 4.4 血清中肝纤维化指标检测45-49
• 4.5 裸鼠血清中特异性抗体Ig E检测49-50
• 4.6 免疫组织化法检测肝组织中特异性IgE50
• 4.7 免疫组织化法检测肝组织中B细胞的表达50-52
• 第５章 讨论52-56
• 第6章 结论56-57
• 参考文献57-60
• 文献综述60-68
• 参考文献65-68
• 本研究受以下课题资助68-69
• 研究成果及论文69-70
• 致谢70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 冯安贵;高勇强;梁瑜;吴媛;陈鹄;张愉快;王可耕;陈姗姗;肖建华;;Sjcb2 DNA疫苗在血吸虫感染小鼠中的保护性作用研究[J];中国人兽共患病学报;2014年07期

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本文编号：680586