念珠地丝菌对五种抗真菌药的体外敏感性及电镜观察

发布时间：2017-08-16 23:11

  本文关键词：念珠地丝菌对五种抗真菌药的体外敏感性及电镜观察

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【摘要】：目的:近年来,系统性真菌感染的发病率在不断上升,很多都是致命性感染,所以条件致病菌,尤其是罕见条件致病菌引起的感染事件应引起足够重视。念珠地丝菌(Geotricum sivicola)是新近发现的一种罕见地丝菌,目前国内已有3例报道,因此对于条件致病菌的治疗显得尤为重要。目前药品市场上可供选择的抗真菌药物很多,但各个药物对不同真菌的敏感性差异很大,且随着抗真菌药的广泛应用,耐药菌株的报道逐年增多。所以,研究并寻找抗真菌的敏感药物,对日后的临床工作有着重要指导意义。朱敬先等已经对该菌进行了一系列的研究,但地丝菌病的最佳治疗方法尚无定论。本次试验分为两部分,第一部分是运用肉汤稀释法检测念珠地丝菌对五种抗真菌药的体外敏感性,判定标准为美国的酵母样真菌敏感性的界定标准。第二部分是在体外药敏试验的基础上应用扫描电镜观察经特比萘芬作用后念珠地丝菌的微观形态学变化。本次试验从微观形态学角度详细观察了特比萘芬对念珠地丝菌的破坏作用,为临床治疗念珠地丝菌感染提供新的指导依据,为抗菌作用机制的研究也奠定了一定的基础。方法:1抗真菌药对念珠地丝菌MIC值的测定1.1菌悬液的制备将菌种复苏并转种后在无菌条件下,用生理盐水冲洗斜面,在血细胞计数板上计数,再用RPMI-1640液体培养基稀释,得到念珠地丝菌及质控菌浓度均为1~5×105cfu/ml的菌悬液。1.2抗真菌药的药液制备将实验所用五种药物各自溶解,配成实验所需的贮存液,于-20℃冰箱保存。实验时用RPMI-1640培养基以2倍梯度稀释,获得10个2倍于终浓度的药液。1.3药液及菌悬液的接种把所配置的五种药物的10个浓度按序放入96孔板的前10个孔,将RPMI-1640培养基加入11~12孔,然后在1~11孔中分别加入菌悬液,在第12孔仅加入RPMI-1640培养基。将实验板培养于37℃的恒温培养箱里,连续培养5天后读取结果。1.4结果判读依据NCCLS M27-A2标准,读取药物对两菌株的MIC值,将质控菌株的MIC值与参考值对比,只有不超过参考值标准实验数据才算作有意义。运用统计学方法对数据进行处理。2扫描电镜标本的制备将特比萘芬组中浓度0.000156μg/ml、0.00125μg/ml、0.01μg/ml、0.08μg/ml及阳性对照孔中的液体分别收集到5个无菌试管中,送扫描电镜室。结果:1抗真菌药对念珠地丝菌的MIC值(μg/ml)伊曲康唑:0.0625~0.5、两性霉素B:0.125~1、氟胞嘧啶:1~16、氟康唑:0.5~16、特比萘芬:0.0025~0.04。2特比萘芬作用念珠地丝菌前后扫描电镜观察经不同浓度特比萘芬作用5d后,扫描电镜显示念珠地丝菌的菌丝体出现了不同程度的破坏。特比萘芬浓度0.000156μg/ml作用下,菌丝表面变得粗糙不光滑、凹凸不平;浓度0.00125μg/ml作用下,菌丝皱瘪、粗细不一;浓度0.01μg/ml作用下,菌丝形态明显改变,出现不规则缺损和虫蚀状孔洞;浓度0.08μg/ml作用下,菌丝体被彻底破坏呈现碎片状;阳性对照孔中的菌体表面光滑饱满,菌丝粗细均匀。结论:1在体外药敏试验中,念珠地丝菌对伊曲康唑显示剂量依赖性敏感,对特比萘芬、两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑均显示敏感。其中特比萘芬的MIC值最低,对念珠地丝菌的抗菌活性最强。2通过扫描电镜观察菌体的微观形态变化,证实特比萘芬具有强大的抗念珠地丝菌活性,且随着药物浓度的增加菌丝被破坏的程度逐渐加重。
【关键词】：念珠地丝菌 抗真菌药 最低抑菌浓度 微观形态学 扫描电镜
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R519
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-14
• 结果14-15
• 附图15-18
• 附表18-19
• 讨论19-22
• 结论22-23
• 参考文献23-25
• 综述 梅毒实验室检查的研究进展25-31
• 参考文献29-31
• 致谢31-32
• 个人简历32

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本文编号：685995