败血症患者解甘露醇罗尔斯顿菌分离与鉴定及其耐药基因分析

发布时间：2017-08-31 19:39

  本文关键词：败血症患者解甘露醇罗尔斯顿菌分离与鉴定及其耐药基因分析

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【摘要】：目的：对一例病因不明败血症患者外周血中病原菌进行分离及鉴定,同时了解分离菌株耐药性并分析耐药相关基因。方法：采集双份败血症患者外周血标本分离划线接种于血平板上,370C常规培养24 h。挑取单个菌落用革兰染色镜检以及VITEK2-compact全自动细菌检测分析系统进行菌种鉴定,然后采用16S rRNA基因PCR及产物测序进一步确定菌种鉴定结果。采用微量二倍稀释法对分离菌株进行药物敏感试验。采用β-内酰胺酶、超广谱p-内酰胺酶确证试验以及AmpC酶和碳青霉烯酶表型试验,了解分离菌株产酶情况及类型。采用PCR分别检测肠杆菌科细菌19种常见β-内酰胺酶或超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶和碳青霉烯酶基因以及21个注释为解甘露醇罗尔斯顿菌β-内酰胺酶基因(GenBank Accession No.:CP010799, CP010800, AJ270257),扩增产物T-A克隆后测序。结果：上述血标本中分离出同一革兰阴性短杆菌,VITEK2-compact全自动细菌检测分析系统及其GN细菌鉴定卡鉴定为解甘露醇罗尔斯顿菌,鉴定值=99%,鉴定编码4003611303500001。PCR及其产物测序结果显示,该解甘露醇罗尔斯顿菌分离菌株16S rRNA基因扩增片段核苷酸序列与GenBank中公布的相应基因序列(Accession No.:AJ270257)相似性为100%。解甘露醇罗尔斯顿菌分离株对头孢曲松、头孢吡肟、环丙沙星、左旋氧氟沙星、替加环素、复方新诺明敏感,但对头孢他啶、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南、氨曲南、庆大霉素、阿米卡星、呋喃妥因耐药。所有19种肠杆菌科细菌常见耐药相关酶类基因PCR扩增结果均为阴性,但可扩增出TK4909850、TK4912955、TK4914470、TK4914495、TK4918990五个解甘露醇罗尔斯顿菌β-内酰胺酶基因条带。与GenBank中相应解甘露醇罗尔斯顿菌β-内酰胺酶基因序列(Accession No.:CP010799, CP010800, AJ270257)比较,解甘露醇罗尔斯顿菌分离株TK49_09850、TK49_12955、TK49_14470、TK49_14495、TK49_18990β-内酰胺酶基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达96.2%(737/766)和96.2%(251/261)、97.3%(838/861)和99.0%(283/286)、100%(795/795)和100%(264/264)、97.5%(980/1005)和98.8%(330/334)、97.5%(807/828)和97.1%(267/275),但与上述肠杆菌科细菌常见β-内酰胺酶或超广谱β-内酰胺酶基因序列相似性很低。结论：该败血症患者感染的病原体为罕见的解甘露醇罗尔斯顿菌。该解甘露醇罗尔斯顿分离菌株有较高耐药性但对不同β-内酰胺类抗生素耐药性有较大差异,其β-内酰胺酶基因与肠杆菌科细菌常见β-内酰胺酶基因完全不同。
【关键词】：解甘露醇罗尔斯顿菌 败血症 分离鉴定 耐药 β-内酰胺酶基因
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R515.3;R446.5
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 引言11-14
• 1. 研究背景11-12
• 2. 研究内容12
• 3. 技术路线12-14
• 第一章 解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株的分离及鉴定14-27
• 1.1 材料14-15
• 1.2 方法15-23
• 1.3 实验结果23-26
• 1.4 小结26-27
• 第二章 解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株的耐药性及β-内酰胺酶的表型检测27-32
• 2.1 材料27
• 2.2 方法27-29
• 2.3 实验结果29-31
• 2.4 小结31-32
• 第三章 解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株β-内酰胺酶耐药基因的检测32-51
• 3.1 材料32-33
• 3.2 方法33-37
• 3.3 实验结果37-50
• 3.4 小结50-51
• 讨论51-54
• 参考文献54-58
• 综述58-67
• 参考文献64-67
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：767530