Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用

发布时间：2017-09-02 20:41

本文关键词：Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用

【摘要】：目的以Ⅰ型登革病毒(DENV)非结构蛋白1(NS1)为免疫原制备NS1特异性单克隆抗体,建立Ⅰ型登革病毒NS1抗原特异性检测方法,并应用于广东以Ⅰ型登革感染为主的临床血清标本检测。方法用原核表达的重组登革病毒NS1蛋白和灭活的Ⅰ型登革病毒免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,间接ELISA、免疫荧光和免疫印迹鉴定,获得DENV1NS1特异性单克隆抗体并建立检测方法。结果共获得26株Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性结合的单抗。通过对26株1型登革病毒NS1蛋白特异性单抗进行多株抗体组合配对,最终筛选出最佳抗体组合。该组合检测DENV1病毒培养上清的检测限为1∶16 384(12.5 pfu/ml),且与其他3个血清型登革病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒均无交叉反应,对500份健康人血清标本检测中,阴性标本497例,临界3例,对发病0~13 d的836份临床确诊的登革热患者血清检测的敏感性为85.6%,明显高于q RT-PCR检测体系(66.3%)(P0.001),亦明显高于病毒分离诊断率(P0.001)。结论成功获得了1组DENV1-NSl蛋白的特异性单克隆抗体,利用该组抗体建立了1种敏感性和特异性更好的只针对DENV1-NS1蛋白的双抗体夹心检测方法,且比其他方法能够覆盖更宽泛的时间范围,该方法可作为登革热早期诊断的工具。
【作者单位】：南方医科大学珠江医院检验医学部;南方医科大学基础医学院
【关键词】： 登革病毒 非结构蛋白 单克隆抗体
【基金】：广东省自然科学基金(2015A030313268) 广东省科技计划(2014A020212492) 广东省医学科学基金(A2015135)
【分类号】：R512.8;R446.6
【正文快照】： 随着全球气候变暖、人口增长和城市化等因素影响,登革热的发病率逐年上升。据WHO统计,全球每年超过1亿人感染登革病毒,其中50万人发展成为登革出血热,死亡人数超过25 000人。自1978年以来,我国南方频发登革热的小规模流行,近年来疫情更为严峻,2002年、2006年和2014年在广东省

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