慢病毒介导的shRNA干扰人HepG2.2.15细胞Akt2基因表达的研究

发布时间：2017-09-09 06:05

  本文关键词：慢病毒介导的shRNA干扰人HepG2.2.15细胞Akt2基因表达的研究

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【摘要】：目的针对Akt2基因构建shRNA慢病毒干扰载体并评价慢病毒介导的RNA干扰在人HepG2.2.15中的基因沉默效应。方法设计Akt2的RNAi寡聚核苷酸序列,利用慢病毒载体构建Akt2的shRNA载体,转染入大肠埃希菌并观察重组表达状况,利用293T细胞包装得到重组腺病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)作为标记,逐孔稀释法确定转染效率及滴度,以实时荧光定量法比较各组对Akt2 mRNA的干扰效果。结果筛选了所构建的3个Akt2靶向序列,包装shRNA慢病毒后转染HepG2.2.15细胞,慢病毒转染后的沉默效率可达85%,比较得出沉默效率最高的靶序列和工作条件。结论本研究成功构建并筛选了针对Akt2的shRNA慢病毒载体,有效抑制HepG2.2.15细胞中Akt2 mRNA的表达。
【作者单位】： 青岛大学医学院附属青岛市市立医院;青岛市消化疾病重点实验室;青岛市市立医院中心实验室;青岛市市立医院消化内二科;
【关键词】： Akt shRNA 慢病毒 HepG..
【基金】：山东省医药卫生科技发展计划项目(12-1-4-16-(9)-jch)
【分类号】：R512.62
【正文快照】： 慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的肝脏炎症,中国是CHB高发国家,HBV携带者人数约1.2亿。目前治疗CHB的方法主要是抑制病毒复制,无法从根本上清除及杀死病毒,约25%未积极治疗的患者将发展为肝硬化和肝癌[1,2]。由于HBV基因

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2 李桂秋;陈淑兰;崔兰英;赵金英;罗文涛;路娟;;HepG2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定抗乙型肝炎病毒复制作用的比较[J];中国临床药理学与治疗学;2010年07期

3 ;[J];;年期

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1 刘坤;HepG2.2.15与HepG2细胞蛋白复合体和分泌蛋白谱差异比较[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

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本文编号：818720