一种适合中国地区HBV流行特征的荧光定量PCR检测方法的初探

发布时间：2017-09-18 09:42

  本文关键词：一种适合中国地区HBV流行特征的荧光定量PCR检测方法的初探

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【摘要】：目的设计1套适合中国地区HBV流行特征的高灵敏度、高特异性的HBV引物探针,建立HBV荧光定量检测的方法。方法在NCBI的Nucletide中输入HBV、China、complete genome等关键词找到中国地区的HBV序列,经比对后在保守序列设计引物探针,引物扩增的PCR产物经PMD-19载体连接制备成质粒标准品并测序验证序列,计算质粒拷贝数,将质粒标准品稀释成不同浓度的质粒标准品,用第三方标准品对质粒标准品做校正,绘制HBV标准曲线,并用Probit分析计算检测下限,验证灵敏度、特异性等。将所建立的HBV荧光定量检测方法检测100例标本,并与罗氏cobas湟Taq Screen MPX Test,version 2.0检测试剂盒检测结果做相关性分析。结果引物探针特异性好,质粒测序结果与目的产物完全吻合,质粒标准品曲线R~20.999,扩增效率为95.43%,线性范围(2×10~2-2.5×10~9)IU/m L,95%检测下限为16.2 IU/m L,批内重复变异系数为0.15%-1.11%,批间变异系数为0.91%-4.67%。与罗氏检测结果相关性高(R=0.96)。结论成功设计出1对适合中国HBV流行特征的引物探针,所建立的HBV荧光定量检测的方法灵敏度高、特异性好、重复性好,为在对中国地区开展血液HBV DNA载量检测及监控提供了技术支撑。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;
【关键词】： HBV流行特点 HBV引物探针 荧光定量PCR 中国地区
【基金】：科技部科研院所技术开发研究专项基金(2014EG150133) 国家自然科学基金(81370669)
【分类号】：R440;R512.62
【正文快照】： 阻断HBV传播一直是输血医学临床和基础研究的主要热点问题[1]。在2010年的全球疾病负担研究中,HBV感染是造成死亡的第10大原因、已经排名在世界卫生工作重点的前端[2],而经血传播是HBV的主要感染途径之一[3]。从HBs Ag ELISA筛查到目前占主导地位的HBV DNA NAT检测,尤其是荧光，

本文编号：874805