山东地区恙虫病东方体感染分子流行病学研究

发布时间：2017-09-19 22:15

  本文关键词：山东地区恙虫病东方体感染分子流行病学研究

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【摘要】：研究背景恙虫病(Scrub typhus, tsutsugamushi disease),又称丛林斑疹伤寒,是一种自然疫源性疾病, 由感染了恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi, O. tsutsugamushi)的恙螨幼虫叮咬而传播给人,以鼠类为主要宿主。该病的临床表现以特征性焦痂或溃疡、高热、淋巴结肿大、皮疹为主要特征,并可引起多种并发症甚至死亡。恙虫病广泛流行于亚洲太平洋沿岸地区,每年发病人数达100万例,因误诊或未及时治疗的患者病死率可高达15%。目前,我国至少29个省(直辖市或自治区),1031个县区存在恙虫病的感染与流行。作为重点疫区之一的山东,其疫情已波及全省80%的地区,且新的疫区不断出现、流行强度逐年增局。恙虫病的流行特征、临床严重程度与感染O. tsutsugamushi的型别有关,而不同国家／地区O. tsutsugamushi基因型的分布存在地域差异。单价疫苗对异型菌株攻击的免疫保护性差,针对不同地区研制含不同类型保护性抗原／基因的多价疫苗是恙虫病疫苗发展的方向。因此,掌握恙虫病流行区的O. tsutsugamushi基因型及分布对于该地区恙虫病的免疫预防及诊断治疗具有重要意义。研究目的1.通过对山东恙虫病主要流行区的病人及宿主动物O.tsutsugamushi感染的调查及实验室分析,探讨O. tsutsugamushi的基因型及其宿主、地区分布特征,阐明该地O. tsutsugamushi流行株及优势株。2.对筛选出的基因变异株STA-07的分子结构进行分析,比较其与国际参考株(Gilliam、Karp、Kato、Kawasaki、Kuroki、Boryong和Shimokoshi)及山东优势株的核苷酸及氨基酸序列的差异,为恙虫病的预防控制提供理论参考。研究方法根据山东省疾病报告信息系统的恙虫病疫情资料及以往研究基础,选取山东省泰安市的岱岳区、新泰市,临沂市的蒙阴县,淄博市的沂源县,青岛市的即墨市、黄岛区,莱芜市的莱城区和枣庄市的市中区、台儿庄区、峄城区为现场调查点,于2013年6月至2015年12月在上述10个调查点分室内室外采用笼夜法进行捕鼠并采集鼠内脏组织。对调查点辖区内各监测医院或卫生室上报的恙虫病病例或疑似病例采集急性期全血及焦痂标本,并收集有关临床及流行病学资料。对采集的血液、焦痂和鼠标本提取基因组DNA,以巢式PCR针对O. tsutsugamushi 56-kDa TSA基因进行扩增以检测标本中的O.tsutsugamushi DNA。对PCR目的基因的扩增产物进行纯化、回收并测序。将本研究所得序列、自NCBI GenBank获得的国际参考株和山东地区以往研究的代表株建立数据库,以Mega5.0软件包进行序列分析：以Blast进行同源性检索,Clustal W程序进行序列排序,采用邻接法(neighbor-joining)绘制系统发育树, bootstrap分析重复数设定为1000。将比对后的序列导入Lasergene软件MegAlign,采用Sequence distance计算序列同源性。根据捕获的宿主动物及O.tsutsugamushi DNA检测结果,计算宿主动物种属构成及感染状况,绘制各型的地区分布图。对筛选的基因变异株STA-07的O.tsutsugamushi 56-kDa TSA的核苷酸及氨基酸进行组分分析,基因编码产物采用SOPMA分析其二级结构、TMHMM预测跨膜区、SiganlP预测信号肽和Protean预测其抗原表位。用Mega5.0及MegAlign分析比较STA-07基因型56-kDa TSA的各可变区核苷酸及氨基酸序列与参考株的差异。结果1.标本收集及感染状况在10个调查点于四个季度中共捕获2360只鼠,包括褐家鼠(1784只,75.59%)、小家鼠(306只,12.97%)、黑线姬鼠(225只,9.53%)、大仓鼠(25只,1.06%),小仓鼠(8只,0.34%)和，

本文编号：884212