广西某地淡水鱼吸虫囊蚴鉴别及其华支睾吸虫感染大鼠致肝胆病理和细胞因子改变

发布时间：2017-09-20 06:43

  本文关键词：广西某地淡水鱼吸虫囊蚴鉴别及其华支睾吸虫感染大鼠致肝胆病理和细胞因子改变

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【摘要】：目的了解广西横县鱼类吸虫感染的虫种,评价形态学结合ITS2序列分析鉴定吸虫囊蚴的有效性。通过对实验动物感染华支睾吸虫后给予促癌药物在短时间内(3-6个月)探索华支睾吸虫可能的诱癌因素。方法采集横县某水库小鱼,采用人工消化法消化收集囊蚴,在解剖镜下分捡单个囊蚴,按形态学特征鉴定分类,提取不同形态囊蚴的DNA后进行ITS序列PCR扩增和测序,获得的序列在NCBI上进行Blast分析,获得完整的ITS2序列后并用Mega 6.0.6软件构建系统发生树。通过对实验大鼠灌胃感染华支睾吸虫囊蚴后,在感染不同时间段对大鼠断尾采血提取血清,根据实验需要和实验试剂的量取部分血清运用酶联免疫法(ELISA)试剂盒检测血清中细胞色素P450 2E1(CYP2E1)、细a胞色素P450 2A6 (CYP2A6)、糖类抗原199(CA199)、甲胎蛋白(AFP)、脂质过氧化物酶(Lipo-xy genase LPO)、白介素6(IL-6)的OD值,利用标准品OD值和相应浓度做出标准线,从而可得到每个检测出的OD值所对应的相应血清浓度,并做柱状图描述不同时间血清物质的动态变化；同时对血清浓度进行统计分析。对实验大鼠分两次解剖,每次各解剖每组的一半,分别在感染大鼠100天后、150天后解剖,均取肝脏做H-E病理切片观察胆管和肝组织的变化,同时对照各组病理切片中病理组织的变化。结果(1)广西横县某水库小型鱼类携带吸虫囊蚴的分子生物学初步检测实验中,形态学鉴别表明,横县某水库小鱼感染有5种不同形态的囊蚴；结合ITS2序列分析表明,这5种囊蚴鉴定为4类不同的吸虫：华支睾吸虫(clonorchis sinensis)、钩棘单睾吸虫(Haplorchis pumilio)、台湾棘带吸虫(Centrocestus formosanus)和日本全冠吸虫(Holostephanus dubinini),其中有两种不同形态的吸虫囊蚴分子鉴定均为华支睾吸虫囊蚴。(2)感染华支睾吸虫能引起大鼠CYP2E1、IL-6浓度增高,感染华支睾吸虫大鼠中CA199、AFP、CYP2A6、LPO浓度检测经统计F检验P0.05没有统计学意义。虽然定量检测出CA199、AFP、CYP2A6、LPO没有统计学差异,但并不能说明华支睾吸虫感染后对这几个细胞因子没有影响,有可能是感染时间上还没有达到,对实验大鼠分两次解剖,每次各解剖每组的一半,分别在感染大鼠100天后、150天后解剖,均取肝脏做H-E病理切片观察肝组织的变化,病理切片结果表明华支睾吸虫感染后能引起肝细胞水肿,变性甚至轻微坏死,同时引起胆管汇管区轻度增宽,小胆管增多,间质纤维化,散在淋巴细胞侵润,且可见有胆管异型增生。已有发现肝硬化、肝癌和胆管癌的癌前变化,我们不能否认如果病情继续发展可能将引起肝癌的发生。结论(1)在横县某水库小鱼中检出4种吸虫囊蚴,分别为华支睾吸虫、台湾棘带吸虫、钩棘单睾吸虫和日本全冠吸虫。仅靠形态学上鉴定吸虫囊蚴种类有一定的缺陷,形态学结合ITS2序列分析可有效避免这些缺陷。(2)华支睾吸虫感染大鼠可致部分细胞因子发生改变,表明肝胆管和肝细胞的受损,并产生病理变化。(3)华支睾吸虫感染大鼠可引起肝细胞水肿、变性、轻微坏死,胆管汇管区增宽,小胆管增多,间质纤维化,散在淋巴细胞侵润。(4)在华支睾吸虫联合20mg/LNDMA感染组中,发现胆管异型增生的现象,这是胆管癌的癌前变化。
【关键词】：吸虫囊蚴 形态学 ITS 分子生物学系统发生树 华支睾吸虫感染 二甲基亚硝胺(NDMA)
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.23
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略词汇表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 参考文献13-15
• 第一部分 广西横县某水库小型鱼类携带吸虫囊蚴的分子生物学初步检测15-28
• 1 材料与方法15-21
• 2 结果21-24
• 3 讨论24-26
• 参考文献26-28
• 第二部分 华支睾吸虫感染与二甲基亚硝胺(NDMA)引起大鼠相关肝胆损伤细胞因子及肝胆管病理变化28-55
• 1 材料28-29
• 2 方法29-36
• 3 结果36-48
• 4 讨论48-51
• 参考文献51-55
• 结论55-56
• 综述56-67
• 参考文献62-67
• 致谢67-69
• 攻读学位期间发表的学术论文目录69

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本文编号：886515