NK细胞Siglec-7表达与慢性HBV感染的相关性研究

发布时间：2017-09-20 18:47

  本文关键词：NK细胞Siglec-7表达与慢性HBV感染的相关性研究

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【摘要】：背景:Siglecs(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素)是一群主要表达于免疫细胞的跨膜蛋白,通常认为Siglecs能结合多糖配体负性调节细胞功能。Siglec-7(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素7)是CD33相关的Siglecs的一员,主要表达于自然杀伤(NK)细胞和单核细胞。Siglec-7通过与含唾液酸的多糖配体结合,能够抑制NK细胞的细胞毒性。但是,Siglec-7表达与NK细胞活性的精确关系仍然不确定。有研究发现在HIV感染中下调的Siglec-7表达反映了NK细胞功能的异常,且与HIV病毒载量相关。但在慢性HBV中,NK细胞上Siglec-7表达的情况尚未被报道。目的:明确Siglec-7表达与NK细胞功能的关系;并探索NK细胞Siglec-7表达与慢性HBV感染的关系。原料和方法:(1)实验标本:正常人及慢性HBV感染患者外周血。(2)通过聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法获得外周血单个核细胞。(3)通过流式细胞术,检测细胞表面受体及细胞因子的表达。(4)通过CD107a脱颗粒试验和IFN-γ释放试验探索不同NK细胞亚群的功能。(5)通过与具有刺激性的特异性抗体共孵育,探索Siglec-7与相应配体结合对NK细胞功能的影响。(6)根据临床资料,慢性HBV感染患者可以分为四期,通过流式细胞术,检测慢性HBV感染患者四个时期的外周血NK上Siglec-7的表达。(7)统计学分析:实验数据采用Graph Pad Prism 5软件进行分析,正态分布数据采用t检验,非正态分布数据采用非参数检验,p0.05被认为有统计学意义。结果:(1)在正常人外周血中,Siglec-7在NK细胞上高度表达(82.6±10.82%),且与不成熟的NK细胞相比,成熟的NK细胞表达更高水平的Siglec-7;与Siglec-7-NK细胞相比,Siglec-7+NK细胞表达较高水平的活化性受体CD16(p=0.0349)、CD38(p=0.0123)、DNAM1(p=0.0024)、NKp30(p=0.0122)及NKp46(p=0.0186),表达较低水平的抑制性受体NKG2A(p=0.024)与CD158b(p=0.0315)。(2)在正常人外周血中,与Siglec-7-NK细胞相比,Siglec-7+NK细胞有更强的CD107a脱颗粒功能和IFN-γ释放能力。(3)与具有刺激性的特异性抗体共孵育,Siglec-7抑制了NK细胞的CD107a表达和IFN-γ释放(p值分别为0.0004、0.0125)。(4)与正常人(82.6±10.82%)相比,慢性HBV感染患者外周血NK细胞上Siglec-7表达(64.94±11.86%)明显降低(p0.01)。在慢性HBV感染的四个不同时期中,免疫耐受期NK细胞上Siglec-7表达(58.4±13.84%)明显低于免疫清除期(66.88±13.72%,p0.01)、非复制期(65.21±17.21%,p0.05)、再活动期(75.03±17.48%,p0.01)。(5)在慢性HBV感染患者外周血中,与Siglec-7-NK细胞相比,Siglec-7+NK细胞具有更高的CD107a表达水平及IFN-γ释放水平(p值分别为0.0028、0.0103)。结论:(1)在正常人外周血中,Siglec-7在NK细胞上高度表达且在成熟的NK细胞上优势表达。(2)Siglec-7+NK细胞比Siglec-7-NK细胞有更强的细胞毒性及细胞因子释放能力。(3)Siglec-7与相应配体作用能抑制自然杀伤细胞的功能。(4)慢性HBV感染患者外周血NK细胞上Siglec-7表达下降,尤其在免疫耐受期更为明显,反映了NK细胞功能异常。
【关键词】：唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素7 自然杀伤细胞 慢性HBV感染 CD107a干扰素-γ
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 符号说明4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 第一部分 Sigelc-7 表达与NK细胞功能的研究16-32
• 1 材料和方法16-20
• 1.1 实验材料16
• 1.2 实验试剂及仪器16-17
• 1.3 实验方法17-20
• 2 实验结果20-29
• 3 讨论29-31
• 4 小结31-32
• 第二部分 NK细胞Siglec-7 表达在慢性HBV感染中的研究32-40
• 1 材料和方法32-35
• 1.1 实验材料32-33
• 1.2 主要试剂与仪器33
• 1.3 实验方法33-35
• 2 结果35-37
• 3 讨论37-38
• 4 小结38-40
• 全文总结40-41
• 参考文献41-44
• 文献综述44-54
• 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士期间发表的文章目录55

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1 邵建营;NK细胞Siglec-7表达与慢性HBV感染的相关性研究[D];重庆医科大学;2016年

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本文编号：889791