EV71病毒受体、Toll样受体及其相关信号通路在EV71感染死亡病例中的影响及意义

发布时间：2017-10-06 12:10

  本文关键词：EV71病毒受体、Toll样受体及其相关信号通路在EV71感染死亡病例中的影响及意义

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【摘要】：目的:最近几年已有研究通过体外细胞实验鉴定出EV71病毒除了有SCARB2这一特异性细胞表面受体之外,还存在另外两种特异性细胞表面受体,即PSGL-1、Annexin A2。在EV71感染人体组织中有2篇文献报道与PSGL-1有关,而无文献报道Annexin A2。同时,有研究表明TLR3和TLR8分别可以识别某些双链RNA病毒、单链RNA病毒,然而未见在人体组织中探讨TLR/MyD88下游信号分子在EV71感染所致重症手足口病中的影响。因此,本研究拟通过免疫组化法检测PSGL-1、Annexin A2是否在EV71感染时提供入侵人体组织的基础;探讨TLR3 mRNA和TLR8 mRNA在EV71感染中的意义;阐明TLR/MyD88下游信号转导分子IRAK-1、TRAF-6、NF-κB p65在EV71感染所致炎症反应中的作用。方法:将9例EV71感染死亡病例(EV71组)作为研究对象,7例非感染性疾病死亡病例(对照组)作为对照,研究已通过本院伦理委员会审核及批准同意,所有死亡病例家长均已签尸检知情同意书。采用免疫组化(IHC)法检测PSGL-1、Annexin A2、TLR3、TLR8、IRAK-1、TRAF-6及NF-κB p65的表达,采用原位杂交(ISH)法检测TLR3 mRNA和TLR8 mRNA的表达。应用Image Pro Plus version 6.0(IPP 6.0)图像分析软件检测图片阳性积分光密度(iod)值,再用spss18.0统计软件对数据进行分析。结果:(1)ev71受体检测结果:ihc法检测显示psgl-1和annexina2在ev71组和对照组肺、脑组织中均有阳性表达,在ev71组肺组织中的iod值分别为125033、9376,在对照组肺iod值分别为60939、4179,两组比较,p0.05;psgl-1和annexina2在ev71组脑组织中的iod值分别为49871、39883,在对照组脑组织中的iod值分别为9932,3810,两组比较,p0.05。(2)tlrs检测结果:(1)ish法检测肺组织tlr3mrna,ev71组9例中有4例、对照组7例中有3例肺泡上皮细胞、支气管壁上皮细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞胞浆呈阳性;ish法检测脑组织tlr3mrna,ev71组9例中仅1例有少许小胶质细胞呈弱阳性,对照组均呈阴性表达。ihc法检测显示ev71组9例肺、脑组织tlr3均呈现阳性表达。(2)ish法检测肺组织tlr8mrna,在ev71组9例中有4例、对照组7例中仅1例部分支气管壁上皮细胞、肺泡上皮细胞、中性粒细胞胞浆呈阳性;ish法检测脑组织tlr8mrna,在ev71组9例中仅1例、对照组7例中有2例神经细胞、小胶质细胞、淋巴细胞的胞浆可见阳性表达。ihc法检测显示ev71组9例肺、脑组织tlr8均呈现阳性至强阳表达。(3)ihc法和ish法检测阳性表达得分比较:ihc法和ish法分别检测ev71组肺组织中tlr3、tlr3mrna的阳性表达得分分别为3.78±0.67、1.11±0.93;在ev71组脑组织中tlr3、tlr3mrna的阳性表达得分分别为3.33±0.5、0.89±0.67。ihc法和ish法分别检测ev71组肺组织中tlr8、tlr8mrna的的阳性表达得分分别为5.22±0.83、1.44±0.53;在ev71组脑组织中tlr8、tlr8mrna的的阳性表达得分分别为4.56±0.73、0.78±0.67。两种检测方法的阳性表达得分在各组间差异均有统计学意义(P0.05)。(4)TLRs信号传导分子检测结果:免疫组化法检测显示IRAK-1、TRAF-6和NF-κB p65在两组肺、脑中均有阳性表达,在EV71组肺组织中IOD值分别为15198、10605、78733,在对照组肺组织中IOD值分别为123613、56820、5165,两组比较,P均小于0.05;IRAK-1、TRAF-6和NF-κB p65在EV71组脑组织中的IOD值分别为8324、3240、35855,在对照组脑组织中IOD值分别为20079、7179、5251,两组相比,P均0.05。结论:(1)人脑、肺组织均存在EV71病毒受体(PSGL-1与Annexin A2),示EV71能够通过与病毒受体结合直接侵犯脑、肺组织。(2)TLR/MyD88下游信号转导分子IRAK-1、TRAF-6、NF-κB p65可能参与了EV71感染所致重症手足口病的促炎反应及抑炎反应过程。(3)对于陈旧性的经10%福尔马林固定及包埋的人脑、肺组织,IHC法比ISH法更敏感检测TLRs的表达。
【关键词】：肠道病毒71型 病毒受体 Toll样受体 信号通路
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.5
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英汉缩略词对照表12-13
• 前言13-17
• 1 材料与方法17-25
• 1.1 研究对象17
• 1.2 实验主要试剂与仪器17-20
• 1.3 实验方法及步骤20-24
• 1.4 结果判读与图片检测24
• 1.5 统计学分析24-25
• 2 结果25-37
• 2.1 PSGL-1 在肺、脑组织中的表达25-26
• 2.2 Annexin A2在肺、脑组织中的表达26-27
• 2.3 PSGL-1 和Annexin A2在EV71组肺、脑组织中的表达比较27
• 2.4 TLR3 mRNA在肺、脑组织中的表达27-28
• 2.5 TLR8 mRNA在肺、脑组织中的表达28
• 2.6 TLR3在EV71组肺、脑组织中表达28
• 2.7 TLR8在EV71组肺、脑组织中表达28-29
• 2.8 IHC法与ISH法检测阳性表达得分比较29
• 2.9 IRAK-1 在肺、脑组织中的表达29-30
• 2.10 TRAF-6 在肺、脑组织中的表达30-31
• 2.11 NF-κB p65在肺、脑组织中的表达31-32
• 2.12 实验结果附图32-37
• 3 讨论37-44
• 4 结论44-45
• 参考文献45-56
• 综述56-72
• 参考文献65-72
• 攻读学位期间发表的学术论文72-73
• 致谢73

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本文编号：982700