四种消毒剂对猪场常见病原微生物的杀灭效果研究

发布时间：2017-10-10 00:25

  本文关键词：四种消毒剂对猪场常见病原微生物的杀灭效果研究

  更多相关文章： 消毒 细菌 病毒 消毒剂 杀灭效果

【摘要】：随着养猪业的快速发展,规模化程度不断提高,在提高了养殖效益的同时,疫病的多发也成为困扰养猪场的重要问题。及时确定引起疫病的病原,并采取有效的生物安全措施是规模化猪场疫病防控的主要工作,消毒是一项经常性和基础性的生物安全措施,选取有效的消毒剂和作用方式,是保证消毒效果的关键。本研究在某规模化猪场发生的一起仔猪腹泻病原的分离鉴定、疫情扑灭的基础上选取生产中常用的四种消毒剂,在实验条件下研究其对大肠埃希菌、志贺菌、链球菌、金黄色葡萄球菌和伪狂犬病病毒等猪场常见病原的杀灭作用。取得以下结果:1.在排除仔猪腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的基础上,从患病猪肝脏中分离获得一株革兰氏阴性细菌,经生化试验和16s rRNA基因序列分析,确定其为大肠埃希菌;分离菌对头孢类抗生素高度敏感,对氧氟沙星类抗菌药物中度敏感,对氨苄西林?链霉素?哌拉西林等药物不敏感;经对病猪用敏感药物治疗和环境消毒,本次疫情得以扑灭。2.分别选取戊二醛-癸甲溴铵、溴化二甲基二癸基烃铵、过硫酸氢钾和次氯酸钠为候选消毒剂,大肠埃希菌、志贺菌、金黄色葡萄球和链球菌为目标菌,研究不同条件下各种消毒剂的最佳使用方法。(1)有效中和剂的选择在中和剂对细菌无明显影响的前提下,确定各种消毒剂的中和剂分别为:戊二醛-癸甲溴铵(500 mg/L)的中和剂为吐温-80(3 000 mg/L)+甘氨酸(1000mg/L);溴化二甲基二癸基烃铵(250 mg/L)的中和剂为吐温-80(3000 mg/L)+卵磷脂(300 mg/L);过硫酸氢钾(2 500 mg/L)的中和剂为硫代硫酸钠(300 mg/L);次氯酸钠(275 mg/L)的中和剂为硫代硫酸钠(300 mg/L)。(2)对大肠埃希菌有效杀灭作用条件在无蛋白干扰物的条件下:戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(31.25 mg/L)、过硫酸氢钾(312.5 mg/L)、次氯酸钠(138 mg/L)对大肠埃希菌(1.57×107cfu)的完全杀灭条件为:37℃、25℃、4℃作用5 min。在有蛋白干扰物时:(1)有机物浓度为3%时:戊二醛-癸甲溴铵(250 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(62.5 mg/L)、过硫酸氢钾(312.5 mg/L),次氯酸钠(138 mg/L)对大肠埃希菌(1.57×107 cfu)的完全杀灭条件为:25℃作用10 min。(2)有机物浓度为25%时,戊二醛-癸甲溴铵(1000 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(125 mg/L)、过硫酸氢钾(625 mg/L)、次氯酸钠(690 mg/L)对大肠埃希菌(1.57×107 cfu)的完全杀灭条件为:25℃作用10 min。(3)对金黄色葡萄球菌的有效杀灭条件在无蛋白干扰物的条件下:戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(31.25 mg/L)、过硫酸氢钾(312.5 mg/L)、次氯酸钠(138 mg/L)对金黄色葡萄球菌(2.15×107 cfu)的完全杀灭条件为:在37℃、25℃、4℃作用5 min。在有蛋白干扰物时:(1)有机物浓度为3%时:戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(125 mg/L)、过硫酸氢钾(1250 mg/L)、次氯酸钠(276 mg/L)对金黄色葡萄球菌(2.15×107)的完全杀灭条件为:在25℃作用10 min。(2)有机物浓度为25%时:戊二醛-癸甲溴铵(1250 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(250 mg/L)、过硫酸氢钾(2500 mg/L)、次氯酸钠(1104 mg/L)对金黄色葡萄球菌(2.15×107 cfu)的完全杀灭条件为:在25℃作用10 min。(4)对志贺菌的有效杀灭条件在无蛋白干扰物时:戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(31.25mg/L)、过硫酸氢钾(312.5 mg/L)、次氯酸钠(138 mg/L)对志贺氏菌(1.24×107 cfu)的完全杀灭条件为:在37℃、25℃、4℃作用5 min。(5)对链球菌的有效杀灭条件在无蛋白干扰物的条件下:戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(31.25 mg/L)、过硫酸氢钾(6250 mg/L)、次氯酸钠(138 mg/L)对链球菌(1.2×107cfu)的完全杀灭条件为:在37℃、25℃、4℃作用5 min。3.戊二醛-癸甲溴铵对伪狂犬病病毒的有效杀灭条件戊二醛-癸甲溴铵(125 mg/L)有效中和剂为甘氨酸(3000 mg/L),此剂量消毒剂和中和剂均对PK15细胞生长无影响;对108.1TCID50的伪狂犬病病毒最佳杀灭条件为25℃作用30 min。在对猪场环境进行消毒杀灭病原时,四种消毒剂使用推荐作用条件为:戊二醛-癸甲溴铵(1250 mg/L)、溴化二甲基二癸基烃铵(250 mg/L)、过硫酸氢钾(2500 mg/L、)次氯酸钠(1104 mg/L),室温条件下(25℃),作用不少于10 min。
【关键词】：消毒 细菌 病毒 消毒剂 杀灭效果
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-14
• 文献综述14-22
• 第一章 猪场常见病原微生物及消毒防控14-22
• 1.1 规模化猪场常见病原微生物及卫生处理14-18
• 1.1.1 常见细菌性病原的卫生处理14-16
• 1.1.2 猪场常见病毒性病原及其卫生处理16-18
• 1.2 消毒在规模化猪场疫病防控中的作用18-19
• 1.2.1 消毒重要意义18
• 1.2.2 猪场常用的消毒方法18-19
• 1.2.3 化学消毒剂的使用与选择19
• 1.3 常用化学消毒剂的作用机制19-22
• 1.3.1 不同种类的消毒机剂对病原微生物的作用机制19-20
• 1.3.2 影响消毒剂消毒效果的因素20-21
• 1.3.3 消毒效果的检测21
• 1.3.4 本研究的目的与意义21-22
• 试验研究22-54
• 第二章 陕西省某规模化猪场致仔猪腹泻病原的分离鉴定22-29
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 病情与检测样品采集22
• 2.1.2 毒株22
• 2.1.3 主要试剂22-23
• 2.1.4 主要仪器23
• 2.2 方法23-25
• 2.2.1 样品中TGEV和PEDV的RT-PCR检测23-24
• 2.2.1.1 引物设计和合成23
• 2.2.1.2 病料总RNA的提取与cDNA合成23
• 2.2.1.3 TGEV和PEDV目的基因的PCR扩增23-24
• 2.2.2 样品中细菌分离鉴定24-25
• 2.2.2.1 细菌分离及纯化24
• 2.2.2.2 分离菌的生化鉴定24
• 2.2.2.3 16s rRNA引物设计24-25
• 2.2.2.4 细菌DNA的提取24
• 2.2.2.5 细菌 16s rRNA的PCR的检测24
• 2.2.2.6 PCR产物的序列测定24
• 2.2.2.7 分离菌的药物敏感性试验24-25
• 2.3 结果25-28
• 2.3.1 病料中TGEV和PEDV的RT-PCR检测25
• 2.3.2 细菌分离鉴定25-28
• 2.3.2.1 细菌分离及纯化25-26
• 2.3.2.2 分离菌株的生化26-27
• 2.3.2.3 分离菌基因组 16s rRNA分析27
• 2.3.2.4 分离菌的药敏试验27-28
• 2.4 治疗效果28
• 2.5 讨论28
• 2.6 小结28-29
• 第三章 四种化学消毒剂对猪场常见病原菌的杀菌作用研究29-45
• 3.1 材料29-30
• 3.1.1 菌株29
• 3.1.2 主要试剂及培养基的配制29-30
• 3.1.3 主要仪器30
• 3.1.4 消毒剂的配制30
• 3.2 方法30-32
• 3.2.1 菌株的复苏30
• 3.2.2 菌落总数的测定30
• 3.2.3 菌悬液的制备30
• 3.2.4 中和剂悬液定量鉴定试验30-31
• 3.2.5 悬液定量杀菌试验31-32
• 3.2.6 有机物对四种消毒剂的杀菌效果的影响32
• 3.3 结果32-42
• 3.3.1 菌落总数测定结果32
• 3.3.2 中和剂使用量的确定32-33
• 3.3.3 悬液定量杀菌结果33-40
• 3.3.3.1 溴化二甲基二癸基烃铵消毒剂对4种病原菌的杀灭作用33-35
• 3.3.3.2 戊二醛--癸甲溴胺消毒剂对4种病原菌的杀灭作用35-37
• 3.3.3.3 过硫酸氢钾消毒剂对4种病原菌的杀灭作用37-39
• 3.3.3.4 次氯酸钠消毒剂对4种病原菌的杀灭作用39-40
• 3.3.4 有机物存在情况下四种消毒剂的杀菌作用40-42
• 3.3.4.1 存在有机干扰物时四种消毒剂对大肠埃希菌的杀灭作用40-41
• 3.3.4.2 存在有机干扰物时四种消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭作用41-42
• 3.4 讨论42-43
• 3.5 小结43-45
• 第四章 戊二醛－癸甲溴铵对猪伪狂病病毒的杀灭作用45-54
• 4.1 材料45-46
• 4.1.1 细胞、毒株45
• 4.1.2 主要仪器与试剂45
• 4.1.3 中和剂45
• 4.1.4 PRV引物设计和合成45-46
• 4.2 方法46-47
• 4.2.1 细胞的复苏及病毒的增殖46
• 4.2.2 伪狂犬病病毒滴度的测定46
• 4.2.3 用于伪狂犬病病毒杀灭的消毒剂的中和剂的选择46-47
• 4.2.4 消毒剂对伪狂犬病病毒的杀灭作用47
• 4.3 结果47-52
• 4.3.1 伪狂犬病病毒滴度的测定结果47-48
• 4.3.2 中和剂的选择与最佳中和剂量确定48
• 4.3.3 复合消毒剂对伪狂犬病病毒杀灭作用的影响48-52
• 4.4 讨论52-53
• 4.5 小结53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-60
• 缩略词表60-61
• 致谢61-63
• 作者简介63

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本文编号：1003300