鸭肝炎病毒PCR-ELISA检测方法的建立

发布时间：2017-10-12 14:19

  本文关键词：鸭肝炎病毒PCR-ELISA检测方法的建立

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【摘要】：为建立检测鸭肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根据DHV VP1基因序列设计1对分别标记生物素和地高辛的引物,采用固相杂交法,将生物素标记的探针固定在酶标板上,再与地高辛标记的产物进行杂交,并通过反复优化确定了10 mg/m L链霉亲和素包被液、10 g/L BSA封闭液、0.5 pmol/L探针、1∶4 000稀释的酶标二抗及最适杂交时间等最佳反应条件,建立了DHV PCR-ELISA检测方法。该方法与鸭肠炎病毒、鸭细小病毒和鸭疫里氏杆菌等无交叉反应,说明该方法特异性强;敏感性试验结果表明,PCR-ELISA最低能检出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常规PCR高100倍。用该方法对50份雏鸭肝提取的RNA样本进行检测,阳性检出率为82%,较RT-PCR检出率高46%。结果表明,该PCR-ELISA方法具有特异、敏感、安全的特点,从而为鸭病毒性肝炎流行病学研究及临床诊断提供了新的途径。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科学技术学院;吉林正方农牧股份有限公司;
【关键词】： 鸭肝炎病毒 VP基因 PCR-ELISA
【基金】：国家现代农业技术体系建设专项(CARS-43) 吉林省科技发展计划项目(20111820) 国家星火计划项目(2012GA-660003)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)是一种由鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)引起的传播速度快、致病性强的急性传染病。该病多表现为雏鸭肝损伤和急性败血症[1]。近几年,由于DVH传播迅速、致病性强、血清型变异多,严重制约了养鸭业的发展。目前按血清型DHV可以分

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本文编号：1019168