Nectin-4基因的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2017-10-13 01:19

  本文关键词：Nectin-4基因的原核表达及多克隆抗体制备

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【摘要】：根据Nectin-4基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-Nectin-4。将重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后,纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白获得高效表达,表达的蛋白以包涵体形式存在。Western blot结果表明表达的蛋白能与GST单抗发生反应,具有较好的反应原性。琼脂扩散试验结果表明制备的抗Nectin-4蛋白多克隆抗体效价达1∶8。由于Nectin-4是小反刍兽疫病毒新近发现的受体,这一研究为后续Nectin-4与小反刍兽疫病毒的相互作用研究奠定了一定基础。
【作者单位】： 安徽农业大学动物科技学院;中国农业科学院上海兽医研究所;
【关键词】： Nectin-基因 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31602063) 安徽省自然科学基金资助项目(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(YJ2015-16) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2016JB12)
【分类号】：Q78;S852.65
【正文快照】： Nectin-4又名脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白,属于免疫球蛋白超家族中的Nectin家族,该家族包括4个Nectin分子(Nectin 1~4)和5个Nectin样分子(Nectin-like 1~5)[1]。Nectin家族成员能够形成同源或异源二聚体参与钙不依赖的细胞黏附过程,与细胞的迁移、增殖及神经突触的形成等功能

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本文编号：1022010