葡萄糖、胰岛素及地塞米松对绵羊Musclin基因启动子调控活性的影响
本文关键词：葡萄糖、胰岛素及地塞米松对绵羊Musclin基因启动子调控活性的影响
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【摘要】：Musclin是一种肌细胞因子,可以调节肌肉细胞的糖代谢过程。目前,其转录和表达调控机制尚未阐明,有关葡萄糖、胰岛素和糖皮质激素对Musclin启动子活性影响的相关研究尚未见报道。本课题组前期已经构建了绵羊Musclin启动子-报告基因(EGFP)表达载体,本试验旨在通过用葡萄糖、胰岛素及地塞米松(人工合成的糖皮质激素)处理转染绵羊Musclin启动子-EGFP表达载体的C2C12细胞,探究这些因素对绵羊Musclin启动子转录调控活性的影响。用不同浓度葡萄糖(0、5、15、25、35mM)、胰岛素(0、10、20、30、40nM)单独或联合35mM葡萄糖、地塞米松(0、10、100、1000 nM)分别处理转染绵羊Musclin启动子-EGFP表达载体的C2C12细胞,然后正常培养(未分化状态)或诱导分化培养(分化状态)24H、48H、72H后,通过用荧光定量PCR检测EGFP基因mRNA表达而比较绵羊Musclin启动子活性的变化,结果表明：1)与未分化状态时相比,C2C12细胞分化48H后绵羊Musclin启动子活性显著升高,分化72H后活性最高。2)不同浓度葡萄糖对不同时间点未分化和分化状态的C2C12细胞中绵羊Musclin启动子的活性均具有上调作用,总体规律是35mM葡萄糖组在不同时间点均表现出较为稳定的高幅度上调。3)无论未分化还是分化状态,正常培养还是高糖培养条件,不同浓度胰岛素对C2C12细胞中绵羊Musclin启动子活性均具有上调作用,总体规律是40nM胰岛素组在不同时间点均表现出较为稳定的高幅度上调。4)在细胞未分化时,地塞米松对绵羊Musclin启动子活性的影响总体表现出上调作用;但在细胞分化状态时,地塞米松对绵羊Musclin启动子活性的影响则因地塞米松剂量及细胞分化阶段不同而不同。
【关键词】：绵羊 Musclin基因启动子 转录调控活性 葡萄糖 胰岛素 地塞米松
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S826
【目录】：
- 摘要7-8
- 文献综述8-13
- 1 Musclin发现及研究进展8-11
- 1.1 Musclin的发现及功能概述8
- 1.2 Musclin基因结构8-9
- 1.3 Musclin与机体代谢9-10
- 1.4 影响Musclin基因表达的因素10-11
- 2 Musclin基因启动子功能研究进展11-13
- 本研究的立项依据与研究意义13-14
- 试验一 葡萄糖对绵羊Musclin基因启动子活性的影响14-34
- 1.1 材料与方法14-24
- 1.1.1 试验用细胞与载体14
- 1.1.2 试验用试剂和耗材14
- 1.1.3 引物合成和数据分析14
- 1.1.4 试验仪器14-15
- 1.1.5 试验用试剂的配制15-16
- 1.1.6 试验基本方法16-24
- 1.2 结果与分析24-31
- 1.2.1 Musclin基因启动子真核表达载体MusclinPro~W-EGFP酶切鉴定结果24-25
- 1.2.2 MusclinPro~W-EGFP在C2C12细胞中转染效率检测25-26
- 1.2.3 经转染C2C12细胞在分化与未分化状态下EGFP mRNA的表达26-27
- 1.2.4 C2C12细胞转染后的RNA提取结果27-28
- 1.2.5 EGFP及GAPDH基因mRNA的PCR扩增与溶解曲线28
- 1.2.6 不同浓度葡萄糖对EGFP mRNA表达的影响28-31
- 1.3 讨论31-34
- 1.3.1 分化对绵羊Musclin启动子活性的影响31-32
- 1.3.2 葡萄糖对绵羊Musclin启动子活性的影响32
- 1.3.3 转染效率的提高32-33
- 1.3.4 实时荧光定量PCR的优化33-34
- 试验二 胰岛素和地塞米松对绵羊Musclin基因启动子活性的影响34-44
- 2.1 材料与方法34-36
- 2.1.1 试验用细胞与载体34
- 2.1.2 试验用试剂和耗材34
- 2.1.3 引物合成、序列分析以及数据统计34
- 2.1.4 仪器与设备34
- 2.1.5 试验用试剂的配制34
- 2.1.6 试验方法34-36
- 2.2 结果与分析36-42
- 2.2.1 不同浓度胰岛素对EGFP mRNA表达的影响36-40
- 2.2.2 不同浓度地塞米松对EGFP mRNA表达的影响40-42
- 2.3 讨论42-44
- 2.3.1 胰岛素对绵羊Musclin启动子活性的影响42
- 2.3.2 地塞米松对绵羊Musclin启动子活性的影响42-44
- 全文结论44-45
- 参考文献45-49
- Abstract49-51
- 致谢51
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