蛹虫草类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响

发布时间：2017-10-13 20:48

  本文关键词：蛹虫草类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响

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【摘要】：本文优化了蛹虫草类胡萝卜素的提取方法,利用动物试验和细胞培养试验研究了蛹虫草类胡萝卜素提取物(CMCE)对小鼠生长、免疫、抗氧化性能的影响以及对癌细胞增殖的抑制作用,研究包含三个部分,共四个试验,试验过程和结果分别摘要如下：第一部分试验以蛹虫草类胡萝卜素的提取得率为考察指标,分别运用酸热提取法、超声提取法、酸热超声提取法、微波提取法、酸热微波提取法、丙酮提取法提取类胡萝卜素,比较这6种方法的提取得率,得出酸热超声提取法是较好的提取方法。采用酸热超声提取法,设盐酸浓度、酸浸时间、沸水浴时间、超声功率、超声温度和超声时间等6个单因素试验,结合L27(3B)正交试验设计,优化提取工艺参数。结果表明：1)得出酸热超声提取法的较优提取条件为盐酸浓度2.25 mol/L,酸浸时间30 min,沸水浴时间6 min,超声功率400 W,超声温度25℃,超声时间25 min; 2)蛹虫草类胡萝卜素提取得率为1105.53 lμg/g,比优化前提高12.12%； 3)影响提取得率大小的因素依次为超声功率、酸浸时间、盐酸浓度、沸水浴时间、超声温度、超声时间。第二部分采用体内试验方法分别探讨了以不同浓度CMCE以及不同种类的类胡萝卜素灌喂小鼠后对其生长、免疫和抗氧化性能的影响,包括两个试验,如下：试验一探究了不同浓度的CMCE对小鼠生长、免疫以及抗氧化性能的影响。将120只ICR小鼠随机分为4组,分别灌喂Omg/mL(对照组)、2mg/mL(低浓度组)、4mg/mL(中浓度组)和8mg/mL(高浓度)的CMCE溶液0.2mL/只／天。结果表明：1)与对照组相比,在正试期14d时,低浓度和中浓度组ADG极显著提高(P0.01),低浓度组F/G显著降低(P0.∞)；而从整个试验期来看,中、低浓度组的ADFI显著高于对照组(P0.05), ADG极显著高于对照组(P0.01),F/G极显著低于对照组(P0.01)：灌喂低浓度和中浓度CMCE能提高小鼠DM消化率(P0.∞)以及血清CHO (P0.05)和TG含量(P0.∞),能提高小鼠十二指肠的绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值；2)低浓度组和中浓度组小鼠脾脏TNF-amRNA的相对表达量极显著高于对照组(P0.01)；而灌喂高浓度的CMCE能提高小鼠血清IgG的含量(P0.001)以及小鼠脾脏IL-2 mRNA的相对表达量(P0.01),能降低小肠三个区段的VC比值；3)低浓度组小鼠血清CAT和GSH-Px活性极显著高于对照组和另外两个处理组(P0.01)；中浓度组小鼠血清MDA的含量显著高于高浓度组(P0.05)；低浓度组小鼠肝脏SOD活性显著高于对照组(P0.05)；肝脏CAT活性随灌喂CMCE浓度的升高而增强,并且高浓度组小鼠肝脏CAT活性显著高于对照组(P0.05)；试验二探究了三种不同的类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响。48只ICR小鼠随机分为4组,分别灌喂大豆油溶液(A组,对照组)、β-胡萝卜素溶液(B组)、叶黄素溶液(C组)和CMCE溶液(D组)0.2mL/只/天。结果表明：1)就整个试验期来看,D组小鼠ADFI显著高于对照组(P0.05), ADG和F/G各组之间无显著差异(P0.05)；D组小鼠血清GLU和CHO的含量分别极显著(P0.01)和显著(P0.05)高于对照组,B和C组小鼠血清TG含量分别显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于D组；2)B组小鼠血清IgG含量显著高于D组(P0.05)；D组小鼠血液WBC, Lymph极显著高于对照组(P0.01), Mon和Mon%显著高于对照组(P0.05)；B组小鼠脾脏IL-2 mRNA的相对表达量显著高于对照组(P0.05),D组小鼠脾脏IL-4和TNF-a mRNA的相对表达量显著高于对照组和C组(P0.05)；3)B组小鼠血清SOD活性显著高于C和D组(P0.05),血清CAT和GSH-Px活性分别显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于D组；C组小鼠血清GSH-Px活性极显著高于其他三组(P0.01)；C,D组小鼠血清MDA含量极显著低于B组和对照组(P0.01)；相比于血清抗氧化指标,肝脏中SOD、CAT以及GPX1基因mRNA的相对表达量,各组之间无显著差异(P0.05)。第三部分试验采用体外细胞培养的方法来探究经初步纯化后的CMCE对两种肿瘤细胞(胃癌细胞MGC80-3和肝癌细胞HepG2)增殖的抑制作用。经过硅胶柱层析初步纯化后,CMCE中类胡萝卜素的含量提高了12倍,再用细胞培养液将其配制成不同的浓度,分别为：60,80,100,120和140μg/mL。同时以顺铂作为阳性对照,以不含药物的细胞培养液为阴性对照开展试验。结果表明：1)作用24h后,CMCE对MGC80-3细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性上升；48h和72h后,80和100μg/mL的CMCE对MGC80-3细胞增殖的抑制作用较强。2)对HepG2来说,与药物共培养24h后,较高浓度的CMCE对HepG2细胞增殖的抑制作用较好；48h后,CMCE对HepG2细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性上升；72h后,120μg/mL的CMCE对HepG2细胞有较强的生长抑制作用。
【关键词】：蛹虫草类胡萝卜素 提取 小鼠 生长 免疫 抗氧化
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-6
• 符号说明6-10
• 第一章 文献综述10-21
• 1 类胡萝卜素简介10
• 2 类胡萝卜素的生产工艺10-12
• 2.1 人工化学合成10-11
• 2.2 有机溶剂萃取11
• 2.3 超临界流体萃取11-12
• 2.4 微生物发酵12
• 3 类胡萝卜素对动物生理功能的影响12-16
• 3.1 β-胡萝卜素对动物生理功能的影响12-13
• 3.2 叶黄素对动物生理功能的影响13
• 3.3 虾青素对动物生理功能的影响13-14
• 3.4 番茄红素对动物生理功能的影响14-15
• 3.5 植物类胡萝卜素提取物对动物生理功能的影响15-16
• 4 蛹虫草简介16
• 5 蛹虫草中的主要活性成分16-19
• 5.1 虫草多糖16-17
• 5.2 虫草素(腺苷)和虫草酸(D-甘露醇)17
• 5.3 虫草蛋白质和氨基酸17
• 5.4 微量元素17-18
• 5.5 蛹虫草类胡萝卜素18-19
• 5.6 其他成分19
• 6 虫草属真菌的开发利用现状和展望19-20
• 7 本课题的研究意义和研究内容20-21
• 第二章 提取试验 蛹虫草类胡萝卜素的提取工艺优化21-33
• 1 材料与方法21-25
• 1.1 材料与试剂21
• 1.2 仪器与设备21
• 1.3 方法21-24
• 1.3.1 蛹虫草粉末的制备22
• 1.3.2 类胡萝卜素标准曲线方程的建立22
• 1.3.3 不同提取方法试验22-23
• 1.3.4 酸热超声提取法单因素试验23
• 1.3.5 正交试验23-24
• 1.3.6 验证性试验24
• 1.3.7 蛹虫草类胡萝卜素提取物的检验24
• 1.4 数据分析方法24-25
• 2 结果与分析25-31
• 2.1 不同提取方法提取蛹虫草类胡萝卜素比较25-26
• 2.2 单因素试验结果26-28
• 2.3 正交试验结果28-30
• 2.4 试验验证结果30
• 2.5 蛹虫草类胡萝卜素提取物的检验及含量测定30-31
• 3 讨论31-32
• 4 小结32-33
• 第三章 灌喂小鼠试验33-59
• 试验一 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响33-45
• 1 材料与方法33-37
• 1.1 材料与仪器33-34
• 1.2 CMCE的制备和分析34-35
• 1.3 动物饲养管理35
• 1.4 试验方法35-37
• 1.4.1 试验设计35
• 1.4.2 平均日增重和平均日采食量统计35
• 1.4.3 样品采集35-36
• 1.4.4 饲料干物质和粗蛋白的表观消化率以及血清生化指标的测定36
• 1.4.5 小肠发育情况测定36
• 1.4.6 血清免疫球蛋白和血液白细胞数量的测定36
• 1.4.7 脾脏白细胞介素和肿瘤坏死因子mRNA相对定量的测定36-37
• 1.4.8 血清和肝脏抗氧化指标的测定37
• 1.5 数据统计与分析37
• 2 结果37-45
• 2.1 蛹虫草类胡萝卜素提取物的制备和分析37-38
• 2.2 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠生活状态和生长性能的影响38
• 2.3 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠干物质及粗蛋白消化率和血清生化指标的影响38-40
• 2.4 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠十二指肠、空肠和回肠形态发育的影响40-41
• 2.5 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫细胞的影响41-42
• 2.6 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠脾脏IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA相对表达量的影响42-43
• 2.7 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠血清和肝脏抗氧化指标的影响43-45
• 试验二 β-胡萝卜素、叶黄素以及蛹虫草类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响45-52
• 1 材料与方法45-48
• 1.1 材料与仪器45-46
• 1.2 动物饲养管理46
• 1.3 试验方法46-48
• 1.3.1 灌喂试验设计46-47
• 1.3.2 平均统日增重和平均日采食量计47
• 1.3.3 样品采集47
• 1.3.4 血清肝功能、肾功能以及能量代谢指标的测定47
• 1.3.5 血清免疫球蛋白和血液免疫细胞含量的测定47
• 1.3.6 脾脏白细胞介素2和4以及肿瘤坏死因子α、肝脏中抗氧化酶基因SOD、CAT以及GPX1 mRNA相对定量的测定47-48
• 1.3.7 血清抗氧化指标的测定48
• 1.4 数据统计与分析48
• 2 结果48-52
• 2.1 三种不同类胡萝卜素对小鼠生长性能的影响48-49
• 2.2 三种不同类胡萝卜素对小鼠血清生化指标的影响49-50
• 2.3 三种不同类胡萝卜素对小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫细胞的影响50
• 2.4 三种不同类胡萝卜素对小鼠脾脏IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA相对表达水平的影响50-51
• 2.5 不同种类胡萝卜素对小鼠血清抗氧化指标和肝脏SOD、CAT以及GPX1 mRNA相对表达水平的影响51-52
• 体内试验结果讨论52-57
• 1 类胡萝卜素对小鼠生长性能的影响52-53
• 2 类胡萝卜素对小鼠干物质和粗蛋白表观消化率以及血清中肝脏和肾脏代谢指标的影响53-54
• 3 不同浓度蛹虫草类胡萝卜素提取物对小鼠小肠形态发育的影响54-55
• 4 类胡萝卜素对小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫细胞的影响55-56
• 5 类胡萝卜素对小鼠脾脏IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA的影响56
• 6 类胡萝卜素对小鼠血清和肝脏抗氧化指标的影响56-57
• 小结57-59
• 第四章 细胞培养试验 蛹虫草类胡萝卜素对肿瘤细胞增殖的抑制作用59-66
• 1 材料与方法59-62
• 1.1 试剂与仪器59-60
• 1.2 蛹虫草类胡萝卜素粗提物的制备60
• 1.3 蛹虫草类胡萝卜素的纯化60-61
• 1.4 蛹虫草类胡萝卜素含量的测定61
• 1.5 胃癌细胞MGC80-3和肝癌细胞Hpeg2的复苏与传代培养61
• 1.6 MTT试验探究蛹虫草类胡萝卜素提取物对肿瘤细胞的生长抑制作用61-62
• 1.7 数据统计62
• 2 结果62-64
• 2.1 蛹虫草类胡萝卜素含量的测定62
• 2.2 CMCE对MGC80-3细胞的生长抑制作用62-63
• 2.3 CMCE对HepG2细胞的生长抑制作用63-64
• 3 讨论64-65
• 4 小结65-66
• 全文结论66-67
• 参考文献67-73
• 附录73-76
• 致谢76-78
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录78-79

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