表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性

发布时间：2017-10-16 08:31

  本文关键词：表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性

  更多相关文章： 鸭瘟病毒 鹅细小病毒 VP 重组病毒

【摘要】：【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间构建了表达该免疫原性基因的重组鸭瘟病毒细菌人工染色体,继而在鸡胚成纤维细胞(CEFs)上拯救获得了重组病毒rDEV-VP2,病毒细胞生长特性与亲本株基本一致,且能诱导鸭体产生GPV VP2特异性的抗体。该研究为研制DEV-GPV二联重组活载体疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所;
【关键词】： 鸭瘟病毒 鹅细小病毒 VP 重组病毒
【基金】：浙江省科技计划项目优先主题重点国际科技合作合作研究项目(2011C14011) 浙江省自然科学基金(LY15C180002) 浙江省公益技术应用研究项目(2016C32070)
【分类号】：S852.65
【正文快照】：

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陈柳;余斌;倪征;华炯钢;叶伟成;云涛;张存;;表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性[J];浙江农业学报;2015年11期

2 邓晓辉;陈柳;叶伟成;李军星;崔尚金;余斌;云涛;崔言顺;孙元;仇华吉;张帅;张存;;共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定[J];中国预防兽医学报;2012年04期

3 李茂祥,李俊宝,郑玉美;小鹅瘟病毒纯化及其理化特性的研究[J];病毒学报;1990年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈柳;余斌;倪征;华炯钢;叶伟成;云涛;张存;;表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性[J];中国农业科学;2016年14期

2 陈柳;余斌;倪征;华炯钢;叶伟成;云涛;张存;;表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性[J];浙江农业学报;2015年11期

3 付强;程立坤;董林;王艳;苗立中;莫玲;沈志强;;猪圆环病毒Cap蛋白亚单位疫苗研究进展[J];畜牧与兽医;2015年03期

4 王晓军;王国珍;;猪圆环病毒2型疫苗研究进展[J];广东农业科学;2014年23期

5 钞安军;郭晓庆;顾阳;朱前磊;付朋飞;崔保安;陈红英;;PCV2 ORF2蛋白重组PRV病毒PGO株的生物学特性[J];中国兽医学报;2014年06期

6 金文杰;吕亚楠;王芳;朱良全;秦爱建;丁家波;;我国小鹅瘟研究进展及成就[J];微生物学通报;2014年03期

7 何妍萍;贾怀杰;王盈盈;刘太安;景志忠;;伪狂犬病病毒载体及其应用的研究进展[J];中国兽医科学;2013年10期

8 郭卉;涂飞;吕亚楠;史荣华;金文杰;邵红霞;钱琨;秦爱建;;抗鹅细小病毒单克隆抗体的制备及其免疫荧光检测方法的建立[J];中国动物传染病学报;2013年04期

9 路明华;路迎迎;王宏俊;;伪狂犬病病毒载体疫苗研究进展[J];动物医学进展;2013年06期

10 刘宇卓;刘飞;李银;黄欣梅;赵冬敏;韩凯凯;;鹅细小病毒LH株的纯化及其生物学特性[J];江苏农业科学;2013年05期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邓晓辉;陈柳;叶伟成;李军星;崔尚金;余斌;云涛;崔言顺;孙元;仇华吉;张帅;张存;;共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定[J];中国预防兽医学报;2012年04期

2 赵冬敏;黄欣梅;刘宇卓;张敬峰;李银;;新型黄病毒在种鹅中垂直传播的研究[J];南方农业学报;2012年01期

3 陈仕龙;陈少莺;王劭;林锋强;江斌;程晓霞;黄梅清;朱小丽;李兆龙;;一种引起蛋鸡产蛋下降的新型黄病毒的分离与初步鉴定[J];福建农业学报;2011年02期

4 曹贞贞;张存;黄瑜;刁有祥;叶伟成;刘月焕;韩婧文;马国明;张冬冬;许丰;王丹;姜甜甜;袁媛;谢小雨;高绪慧;唐熠;施少华;万春和;张晨;何玢;杨梦婕;陆新浩;张冰;张国中;马学军;张大丙;;鸭出血性卵巢炎的初步研究[J];中国兽医杂志;2010年12期

5 尹文玲;尹龙勃;叶伟成;孙学强;姚火春;张淼涛;王一成;张存;;猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建[J];病毒学报;2010年04期

6 张存;叶伟成;王一成;袁秀芳;尹龙勃;尹文玲;刘蔓雯;;牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性[J];科学通报;2009年24期

7 琚春梅;陈焕春;郗鑫;刘正飞;曹胜波;;表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定[J];中国农业科学;2006年08期

8 方六荣,肖少波,江云波,牛传双,张辉,陈焕春;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK~-/gG~-/GP5~+的构建及其生物学特性初步探讨[J];病毒学报;2004年03期

9 吕建强,陈焕春,赵俊龙,方六荣,何启盖,熊符;表达猪细小病毒VP_2基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特征研究[J];病毒学报;2004年02期

10 潘兹书,张楚瑜,陈玉栋,闵平;表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建[J];武汉大学学报(理学版);2002年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄安国,白安斌,盘宝进,陈西宁,姚瑞英,杜坚,梁家幸,蒋玉雯;鸭瘟病毒的分离和鉴定[J];广西畜牧兽医;2003年06期

2 李明,赵立魁,白静;商品肉鸭鸭瘟病毒河南株的分离与鉴定[J];河南农业科学;2005年10期

3 王红海;胡薛英;苏敬良;何双辉;程永友;郭玉;;商品肉鸭鸭瘟病毒的分离与鉴定[J];中国预防兽医学报;2006年01期

4 王玉泉;;鹅感染鸭瘟病毒病的诊断和防治[J];赤峰学院学报(自然科学版);2009年03期

5 郑福英,刁有祥;新型鸭瘟病毒的提纯方法研究[J];山东畜牧兽医;2003年06期

6 张任娜;覃志初;帅领;刘晓燕;王豪举;;鸭瘟病毒的分离与鉴定[J];安徽农学通报;2007年20期

7 张艳芳;谢芝勋;谢丽基;刘加波;范晴;庞耀珊;罗思思;邓显文;谢志勤;;鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[J];中国畜牧兽医;2014年03期

8 蒋涛;刘维全;张乐萃;徐一;王英华;;疑似鸭瘟病毒的分离培养、鉴定[J];上海畜牧兽医通讯;2007年06期

9 徐晓娟;郭霄峰;魏平华;;鸭瘟病毒研究进展[J];养禽与禽病防治;2012年10期

10 赵军;杨孝朴;宋晓育;;鸭瘟病毒的免疫学研究进展[J];生物技术通报;2014年07期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨发龙;岳华;张焕容;汤承;;基于Real-time PCR技术的抗鸭瘟病毒体外药效评价[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年

2 张艳芳;谢芝勋;谢丽基;刘加波;庞耀珊;范晴;罗思思;邓显文;谢志勤;;鸭黄病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年

3 卢杏通;廖明;郭霄峰;赵明秋;刘穗;;鸭瘟病毒基因组核酸制备[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年

4 刘菲;程安春;汪铭书;宋涌;廖永洪;袁桂萍;韩晓英;徐超;;鸭瘟病毒强毒株在急性人工感染成年鸭体内分布规律的研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年

5 宋涌;程安春;汪铭书;刘菲;廖永洪;袁桂萍;韩晓英;徐超;;聚合酶链反应(PCR)检测鸭瘟病毒弱毒和强毒方法的建立和应用研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年

6 程安春;汪铭书;刘菲;宋涌;袁桂萍;韩晓英;徐超;廖永洪;;检测鸭瘟病毒PCR方法的建立及其在临床诊断和免疫与致病机理研究中的初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下）[C];2003年

7 冀君;谢青梅;曹永长;陈峰;马静云;毕英佐;;用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测鸭瘟病毒[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年

8 文永平;程安春;汪铭书;路立婷;;鸭瘟病毒TK基因的转录时相和表达时相分析[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年

9 韩先杰;王君伟;马波;;鸭瘟病毒TK基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

10 路立婷;程安春;汪铭书;蒋金凤;朱德康;贾仁勇;罗启慧;陈孝跃;;鸭瘟病毒UL46基因产物属性分析[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 徐密勋;鹅的鸭瘟病毒病[N];中国畜牧报;2002年

2 山东省东营市畜牧局 祁尚绥;鹅的鸭瘟病毒感染诊治一例[N];江苏农业科技报;2006年

3 许英民;鹅感染鸭瘟病毒病的防治[N];中国畜牧报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 杨发龙;鸭瘟病毒感染及其诱导α干扰素mRNA水平的动态定量研究[D];四川大学;2006年

2 徐超;鸭瘟病毒gC基因的发现、原核表达和应用研究[D];四川农业大学;2008年

3 贾仁勇;鸭瘟病毒蛋白质组二维电泳特性和UL24基因的发现、原核表达及应用研究[D];四川农业大学;2008年

4 常华;鸭瘟病毒gE基因功能初步研究[D];四川农业大学;2011年

5 信洪一;鸭瘟病毒US3基因的发现、原核表达及应用研究[D];四川农业大学;2009年

6 范薇;鸭瘟病毒gD基因发现及重组蛋白应用研究[D];四川农业大学;2013年

7 邢明伟;表达AIV H7HA和H9HA基因重组鸭瘟病毒载体的构建与DNA疫苗研究[D];东北林业大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马腾飞;鸭瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其强弱毒株UL2基因差异分析[D];山东农业大学;2015年

2 赵丹丹;鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及胶体金试纸条检测方法的建立和应用[D];山东农业大学;2015年

3 杨丽莎;鸭瘟病毒UL22基因的多抗制备、细胞内定位及真核表达研究[D];四川农业大学;2014年

4 左伶洁;鸭瘟病毒UL1与gH蛋白相互作用的初探[D];四川农业大学;2014年

5 韩晓英;人工感染鸭瘟病毒急性病理模型的病理学发展规律及免疫荧光检测石蜡切片中鸭瘟病毒分布规律的研究[D];四川农业大学;2004年

6 陈普成;鸭瘟病毒部分基因组序列的克隆及重组病毒转移载体的构建[D];中国农业科学院;2009年

7 张坤;鸭瘟病毒SDWF株的分离鉴定及致病性研究[D];山东农业大学;2012年

8 娄昆鹏;鸭瘟病毒UL28基因的克隆、原核表达、细胞定位和转录时相研究[D];四川农业大学;2009年

9 金映红;鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达及其间接ELISA方法的建立[D];新疆农业大学;2008年

10 杨晓圆;鸭瘟病毒US4基因的原核表达及应用[D];四川农业大学;2011年

，

本文编号：1041706