进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定

发布时间：2017-10-18 05:35

  本文关键词：进口胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒的分离及鉴定

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【摘要】：目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。取生长状态良好的MDBK细胞,按1%比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDV FBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代。采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定。结果扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1 NADL株的核苷酸序列一致性为92.2%,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为10~4拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于10~(4.92)拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性。结论购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株。
【作者单位】： 吉林农业大学;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【关键词】： 牛病毒性腹泻病毒 胎牛血清 分离 鉴定
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒(bovineviral diarrhea virus,BVDV)引起的,临床上以牛黏膜发炎、糜烂、坏死以及腹泻为特征的疾病[1]。BVDV属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus),与猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)和绵羊边界病毒(border disease vi

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