减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性

发布时间：2017-10-18 11:13

  本文关键词：减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性

  更多相关文章： 减毒鼠伤寒沙门菌 三型分泌系统 sop E基因 平衡致死系统 活疫苗载体

【摘要】：为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。
【作者单位】： 河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共卫生重点实验室;洛阳职业技术学院;
【关键词】： 减毒鼠伤寒沙门菌 三型分泌系统 sop E基因 平衡致死系统 活疫苗载体
【正文快照】： Received:April 7,2016;Accepted:June 28,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(Nos.31302059,31572489),Scientific and Technological Project ofHenan Province(No.152102110078),Doctor Foundation of Henan University of Science and Techno

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