对我国2012～2015年部分地区鸡AIV H9N2流行株的流行变异及抗原性研究

发布时间：2017-10-18 18:35

  本文关键词：对我国2012～2015年部分地区鸡AIV H9N2流行株的流行变异及抗原性研究

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【摘要】：中国大陆于1994年在广东省首次报道并分离得到H9N2亚型禽流感病毒,随后该亚型病毒广泛传播至我国大部分省区。近年来,关于H9N2亚型禽流感病毒的分离报道呈持续上升态势,该病的流行每年都给我国养禽业带来巨大经济损失。同时H9N2亚型禽流感病毒还可以为新出现感染人的H7N9、H10N8亚型禽流感病毒提供内部基因,潜在威胁人类健康安全,具有重要的经济和公共卫生意义。为弄清H9N2病毒在我国的流行变异情况,本研究对2012~2015年分离到的42株H9N2亚型AIV进行全基因组测序和遗传进化树构建,并选取其中的18株代表株制备单因子血清,进行交叉HI试验,以此来研究H9N2流行株之间的抗原性分化情况,最后用免疫保护实验,评价毒株Ck/GX/SIC6/13对流行株的免疫保护效果。遗传进化分析表明:42株H9N2病毒均属于Ck/Bei-like分支(h9.4.2),其中97.6%(41/42)的分离株属于h9.4.2.5亚分支,2.4%(1/42)的分离株属于h9.4.2.6亚分支,其HA基因之间的核苷酸相似性为86.7%~99.7%,与经典疫苗株的相似性为88.6%~92.6%。分离株形成4种不同的重组基因型(S,U,V,W),基因型S是流行的主基因型,占研究毒株的92.8%(39/42);基因型V、W为新重组基因型,其中基因型V和基因型W分别整合了来源于G9-like谱系的NA基因和wild waterfowl-like谱系的PB2基因,使H9N2病毒的基因重组现象愈加复杂化。特定氨基酸位点分析表明:所有分离株的HA蛋白裂解位点有两种模式,分别为PSRSSR↓GLF(97.6%,41/42)和PARSSR↓GLF(2.4%,1/42),没有多个连续碱性氨基酸插入,均符合低致病性禽流感病毒的分子特征。部分毒株的HA受体结合位点模式与人流感病毒受体结合位点类似,92.8%(39/42)的毒株在HA蛋白上出现了与哺乳动物适应性相关的Q226→L突变;95.2%(40/42)的病毒在NA茎部出现了与毒力增强相关的63-65位点三个氨基酸缺失;97.6%(41/42)的毒株M2蛋白发生了与金刚烷等药物耐药性相关的S31→N突变;本研究分离株中仅有2.4%(1/42)的毒株在PB2基因中出现E627→K,没有D701→N突变出现。交叉HI试验结果表明:18株新分离株单因子抗血清对于相同和不同病毒抗原的HI效价差异为0~9 log2,它们之间的抗原相关性R值为0.41~1,说明即使来源同一分支的H9N2亚型AIV,其抗原性也正在逐渐分化,抗原性差异各异的流行株同时存在给该病的防控带来困难。本研究根据遗传进化树和交叉HI实验结果,将18株新分离株分为3个抗原群(A、B、C),结合HA基因进化分支和毒株分离时间及地点等因素,3个抗原群的出现大致呈现出A→B→C的先后关系。免疫保护实验表明:H9N2早期分离株制备的灭活疫苗对现今H9N2流行毒株不能起到有效保护,对A群病毒的保护率仅为30%~50%;毒株Ck/GX/SIC6/13制备的灭活疫苗也只能保护本毒株的攻毒,保护率为90%,而对其余毒株的保护效果均不理想,提示近年H9N2流行毒株的流行变异较为频繁,流行株之间的抗原性复杂、交叉保护力差。
【关键词】：AIV H9N2 流行变异 抗原性 免疫保护
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文缩略词7-12
• 1 引言12-16
• 1.1 禽流感概述12
• 1.2 AIV H9N2亚型在我国的流行情况12-13
• 1.3 AIV H9N2亚型基因重组现状13-14
• 1.4 AIV H9N2亚型的疫苗防控14
• 1.5 潜在的公共卫生风险14-15
• 1.6 本研究的目的意义15-16
• 2 材料与方法16-23
• 2.1 材料16-18
• 2.1.1 相关试剂16
• 2.1.2 鸡胚及实验动物16
• 2.1.3 主要仪器16
• 2.1.4 生物信息学软件16
• 2.1.5 毒株16-18
• 2.2 病毒的分离鉴定与RT-PCR扩增18-20
• 2.2.1 病毒的分离18
• 2.2.2 病毒的鉴定和纯化18
• 2.2.3 病毒RNA的抽提18-19
• 2.2.4 RT-PCR扩增引物19
• 2.2.5 各基因片段一步法RT-PCR扩增19-20
• 2.2.6 PCR产物的回收和纯化20
• 2.3 H9N2亚型AIV全基因组测定及遗传进化分析20-21
• 2.3.1 全基因组测序20
• 2.3.2 序列拼接和遗传演化分析20-21
• 2.3.3 基因型划分21
• 2.4 H9N2亚型AIV分离株抗原性分析21-22
• 2.4.1 H9N2亚型AIV灭活油乳剂疫苗的制备21
• 2.4.2 单因子血清的制备21
• 2.4.3 不同毒株间的抗原交叉反应测定21
• 2.4.4 抗原性差异分析21-22
• 2.5 免疫保护实验22-23
• 2.5.1 病毒半数鸡胚感染量（EID50）的测定22
• 2.5.2 AIV H9N2亚型排毒规律的研究22
• 2.5.3 毒株Ck/GX/SIC6/13的免疫保护效果评价22-23
• 3 结果与分析23-54
• 3.1 H9N2亚型AIV的流行分布情况23-25
• 3.2 HA基因25-32
• 3.2.1 HA基因遗传进化分析25
• 3.2.2 HA基因核苷酸序列分析及相似性比较25
• 3.2.3 HA蛋白氨基酸序列及特定氨基酸位点分析25-32
• 3.3 NA基因32-40
• 3.3.1 NA基因遗传进化分析32
• 3.3.2 NA基因核苷酸序列分析及相似性比较32
• 3.3.3 NA蛋白氨基酸序列及特定氨基酸位点分析32-40
• 3.4 内部基因40-45
• 3.4.1 PB2基因遗传进化分析40
• 3.4.2 PB1基因遗传进化分析40
• 3.4.3 PA基因遗传进化分析40
• 3.4.4 NP基因遗传进化分析40
• 3.4.5 M基因遗传进化分析40-41
• 3.4.6 NS基因遗传进化分析41
• 3.4.7 内部基因上特定氨基酸位点分析41-45
• 3.5 重组基因型划分结果45-47
• 3.6 抗原性分析结果47-52
• 3.7 免疫保护实验结果52-54
• 3.7.1 H9N2亚型AIV不同攻毒方式排毒规律的研究52-53
• 3.7.2 免疫保护实验53-54
• 4 讨论54-60
• 4.1 H9N2亚型AIV的流行趋势54
• 4.2 表面基因的变异情况54-57
• 4.2.1 HA基因裂解位点模式与NA基因茎部缺失54-55
• 4.2.2 HA蛋白受体结合位点55-56
• 4.2.3 NA蛋白红细胞吸附位点和神经氨酸酶抑制位点56
• 4.2.4 HA、NA蛋白潜在糖基化位点56-57
• 4.3 内部基因特定氨基酸位点57-58
• 4.4 内部基因的基因重组情况58
• 4.5 抗原性分析58-59
• 4.6 免疫保护实验59-60
• 5 结论60-61
• 致谢61-62
• 参考文献62-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：1056486