动物双歧杆菌对小鼠肠道黏膜损伤的缓解作用及其机理研究

发布时间：2017-10-20 21:16

  本文关键词：动物双歧杆菌对小鼠肠道黏膜损伤的缓解作用及其机理研究

  更多相关文章： 肠道黏膜 溃疡性结肠炎 双歧杆菌BAA6 紧密连接蛋白 肠道菌群

【摘要】：肠道是机体消化吸收营养物质的主要场所,同时还具有屏障作用。正常肠道屏障功能应包括肠黏膜上皮屏障、肠道免疫系统、肠道菌群和肠道内分泌,其中最重要的为肠黏膜上皮屏障。损伤的肠道黏膜层通透性增加,导致家畜免疫力降低,肠道菌群紊乱,极易引发肠道炎症性疾病,降低其生产性能甚至死亡。双歧杆菌作为典型的肠道益生菌,不仅能够在家畜肠道内定植调节肠道菌群,抑制有害菌的繁殖,还具有预防和治疗腹泻、提高机体免疫力等功能特性。本研究通过建立小鼠溃疡性结肠炎模型,观察动物双歧杆菌A6对小鼠肠道黏膜组织损伤的预防和缓解作用,及其对小鼠肠黏膜免疫系统平衡、紧密连接蛋白表达量和肠道菌群的影响,从分子水平上阐明益生菌改善肠道黏膜损伤的机制。以BALB/c小鼠UC为实验模型,分为正常组、模型组、葡聚糖硫酸钠+1×1010cfu/ml BAA6干预组、葡聚糖硫酸钠+1×108cfu/ml BAA6干预组和葡聚糖硫酸钠+1×106cfu/ml BAA6干预组。结果表明,UC模型组小鼠结肠肠道黏膜上皮损伤严重,预先口服BAA6菌株的UC小鼠呈现出不同程度好转,呈剂量依赖性,小鼠结肠长度缩短程度明显减少(P0.05),结肠炎疾病活动指数、髓过氧化物酶活力均显著低于模型组(P0.05),维持Th1/Th2细胞平衡和肠道菌群状态,C laudin-2、 STAT6、GATA4、Cdx2表达量较模型组显著减少(P0.05)。口服适量BAA6对小鼠肠道黏膜损伤具有预防作用,其机制可能是通过维持Th1/Th2细胞平衡,减少Th1细胞因子IL-13的分泌量,抑制STAT6通路和GATA4、Cdx2的激活,降低Claudin-2表达量,从而达到降低肠道通透性、减轻小鼠结肠黏膜损伤的目的,同时还具有维持肠道菌群平衡的作用,有利于恢复肠道屏障功能。
【关键词】：肠道黏膜 溃疡性结肠炎 双歧杆菌BAA6 紧密连接蛋白 肠道菌群
【学位授予单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816;S856.4
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-17
• 1.1 肠道屏障功能的研究进展11-12
• 1.2 紧密连接蛋白研究现状12-13
• 1.2.1 紧密连接蛋白介绍12
• 1.2.2 紧密连接改变与肠道疾病关系12-13
• 1.2.3 紧密连接蛋白与肠道免疫屏障作用关系13
• 1.3 肠道菌群研究进展13-15
• 1.3.1 肠道菌群介绍13-14
• 1.3.2 肠道菌群功能及影响因素14
• 1.3.3 肠道菌群与肠道黏膜损伤关系14-15
• 1.4 益生菌研究进展15-16
• 1.4.1 益生菌介绍15
• 1.4.2 益生菌对肠道黏膜的影响15-16
• 1.5 本研究的目的及意义16
• 1.6 技术路线16-17
• 第2章 动物双歧杆菌A6对结肠炎小鼠肠道屏障损坏预防作用的研究17-29
• 2.1 试验材料17-18
• 2.1.1 试验动物与菌株17
• 2.1.2 主要试剂17
• 2.1.3 主要试剂的配制17-18
• 2.1.4 主要仪器18
• 2.2 试验方法18-21
• 2.2.1 菌株的活化及收集18
• 2.2.2 急性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立与分组18-19
• 2.2.3 结肠炎小鼠生长状况的观察测定19
• 2.2.4 结肠炎疾病活动指数(disease activity index，DAI)19
• 2.2.5 小鼠结肠大体情况及长度变化19
• 2.2.6 结肠病理切片及HE染色19-20
• 2.2.7 肠道组织病理学评分20-21
• 2.2.8 髓过氧化物酶(MPO)活性测定21
• 2.2.9 统计学处理21
• 2.3 试验结果21-26
• 2.3.1 小鼠体重变化情况21-22
• 2.3.2 小鼠结肠情况及长度变化22-23
• 2.3.3 小鼠结肠炎疾病活动指数(DAI)变化23
• 2.3.4 小鼠结肠组织学损伤评分变化情况23-25
• 2.3.5 各组小鼠髓过氧化物酶含量变化情况25-26
• 2.4 讨论26-27
• 2.5 本章小结27-29
• 第3章 动物双歧杆菌A6对小鼠肠道屏障损坏预防作用机制的研究29-43
• 3.1 试验材料29-30
• 3.1.1 主要试剂29
• 3.1.2 主要仪器29-30
• 3.2 试验方法30-34
• 3.2.1 总RNA的抽提及逆转录30-31
• 3.2.2 检测结肠组织中紧密连接蛋白Claudin-2 的表达水平31-32
• 3.2.3 酶联免疫吸附法测定结肠组织细胞因子表达水平32-33
• 3.2.4 Real-time PCR法检测结肠组织中STAT6的m RNA表达量33
• 3.2.5 Real-time PCR法检测结肠组织中转录因子GATA4、CDX2的mRNA表达量33-34
• 3.2.6 统计学处理34
• 3.3 试验结果34-40
• 3.3.1 紧密连接蛋白Claudin-2 表达水平变化34-36
• 3.3.2 细胞因子ELISA数据结果36-39
• 3.3.3 小鼠结肠组织中STAT6的mRNA表达水平变化39-40
• 3.3.4 小鼠结肠组织中转录因子GATA4和CDX2的mRNA表达水平变化40
• 3.4 讨论40-42
• 3.5 本章小结42-43
• 第4章 动物双歧杆菌A6对小鼠肠道菌群平衡恢复的研究43-57
• 4.1 试验材料43-44
• 4.1.1 主要试剂43
• 4.1.2 主要试剂溶液的配制43
• 4.1.3 主要仪器43-44
• 4.2 试验方法44-47
• 4.2.1 小鼠粪便基因组总DNA的提取44-45
• 4.2.2 肠道菌群PCR引物及特异性检测45
• 4.2.3 获取目的菌属的标准DNA模板45-46
• 4.2.4 目的菌属标准DNA模板浓度测定46
• 4.2.5 各目的菌属RT-PCR标准曲线的建立46
• 4.2.6 RT-PCR法检测小鼠粪便中肠道菌群的数量46-47
• 4.2.7 统计学处理47
• 4.3 试验结果47-54
• 4.3.1 小鼠粪便样品中总DNA提取结果47-48
• 4.3.2 目的菌株标准DNA模板浓度测定结果48
• 4.3.3 引物特异性的验证结果48-50
• 4.3.4 目的菌属定量PCR标准曲线的建立50-51
• 4.3.5 小鼠粪便样品中肠道菌群含量的测定结果51-54
• 4.4 讨论54-55
• 4.5 本章小结55-57
• 结论57-59
• 致谢59-61
• 参考文献61-67
• 作者简介67
• 攻读硕士学位期间发表的论文67
• 攻读硕士学位期间参研的项目67-68

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李梅;仝春晖;刘小杰;;大鼠模型研究乳酸菌调节血脂作用[J];乳业科学与技术;2013年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 石梦玄;动物双歧杆菌对小鼠肠道黏膜损伤的缓解作用及其机理研究[D];河北工程大学;2016年

，

本文编号：1069411