PD-1在乙脑病毒外周免疫逃逸过程中作用的研究

发布时间：2017-10-22 16:07

  本文关键词：PD-1在乙脑病毒外周免疫逃逸过程中作用的研究

  更多相关文章： 免疫应答 JEV PD-1 CD274 IL-10

【摘要】：日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种人畜共患传染病。JEV具有嗜神经性,在外周可逃避机体的免疫防御,穿越血脑屏障到达中枢神经系统,感染神经元并刺激小胶质细胞及星形胶质细胞产生大量的炎症因子,暴发炎症反应,从而致病。目前,关于JEV免疫逃逸机制的研究较少,具体机制尚不清楚。本课题组前期研究结果显示在JEV-P3感染C57BL/6小鼠后,伴随着CD4~+T细胞比例下降及CD4~+T细胞表面抑制性分子PD-1的表达显著升高。基于以上研究结果,我们进一步开展了PD-1在JEV感染过程中相关功能的研究,以PD-1-/-小鼠建立了JEV-P3感染模型,对JEV感染后相关免疫细胞及免疫分子进行了研究。结果发现:在JEV感染早期PD-1-/-小鼠CD4~+T细胞比例略有增加,逆转了JEV感染BALB/c小鼠后CD4~+T细胞比例降低的趋势;JEV-P3感染3天后,PD-1-/-小鼠DC表面CD274的表达显著高于BALB/c小鼠;JEV-P3感染后PD-1-/-小鼠MDSCs及CD19~+B细胞持续分泌IL-10的时间延长。但是JEV-P3感染PD-1-/-小鼠及BALB/c小鼠后,两者的死亡率没有显著差异。综上所述:CD4~+T细胞比例的变化说明了PD-1的缺失更好地激活了免疫应答,DC表面CD274比例的升高及IL-10分泌时间的延长说明了PD-1的缺失可能会使其它免疫抑制通路抑制作用增强,使得JEV在外周仍然可以发生免疫逃逸并进入中枢神经系统引起致病,因而死亡率没有差异。该研究有助于更好的理解JEV感染过程中免疫逃逸的机制,为相关研究提供借鉴。
【关键词】：免疫应答 JEV PD-1 CD274 IL-10
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 缩略语表（Abbreviation）9-10
• 1 文献综述10-26
• 1.1 乙型脑炎简介10
• 1.2 乙型脑炎的流行病学10-12
• 1.2.1 乙型脑炎的分布与流行10-11
• 1.2.2 乙型脑炎的传播模式11-12
• 1.3 乙型脑炎病毒的病原学特征12-16
• 1.3.1 乙型脑炎病毒的形态与结构12-13
• 1.3.2 乙型脑炎病毒的理化性质13-14
• 1.3.3 乙型脑炎病毒的复制14-15
• 1.3.4 乙型脑炎病毒的致病过程15-16
• 1.4 乙型脑炎的临床症状与危害16-17
• 1.5 乙型脑炎的诊断与防控17-18
• 1.5.1 乙型脑炎的诊断17
• 1.5.2 乙型脑炎的防控17-18
• 1.6 JEV相关的免疫抑制机制简述18-26
• 1.6.1 DC介导的免疫抑制18-19
• 1.6.2 MDSCs介导的免疫抑制19-21
• 1.6.3 抑制性分子介导的免疫抑制21-25
• 1.6.4 IL-10介导的免疫抑制25-26
• 2 目的与意义26-27
• 3 实验材料与方法27-38
• 3.1 实验材料27-30
• 3.1.1 病毒、细胞27
• 3.1.2 主要药品和试剂27-28
• 3.1.3 培养基及其配制28
• 3.1.4 溶液及其配制28-29
• 3.1.5 实验动物29
• 3.1.6 实验所用手术器械29
• 3.1.7 重要仪器及设备29-30
• 3.2 实验方法30-38
• 3.2.1 细胞的复苏、培养及传代30
• 3.2.2 JEV-P3株的扩增与滴定30-32
• 3.2.3 bmDCs细胞的制备32
• 3.2.4 脾脏CD4~+ T淋巴细胞、CD8~+ T淋巴细胞的流式分选32-33
• 3.2.5 DC-T淋巴细胞共培养33-34
• 3.2.6 JEV-P3感染BALB/c小鼠及PD1/- 小鼠34-35
• 3.2.7 小鼠血液单细胞悬液的制备35
• 3.2.8 小鼠脾脏单细胞悬液的制备35-36
• 3.2.9 细胞表面染色和胞内染色36-37
• 3.2.10 手术器械消毒37
• 3.2.11 实验动物及废物无害化处理37
• 3.2.12 流式细胞术数据分析37
• 3.2.13 数据统计分析37-38
• 4 结果与分析38-59
• 4.1 空斑试验测定JEV-P3株病毒滴度38
• 4.2 小鼠骨髓来源树突状细胞的培养38-39
• 4.3 DC-T细胞共培养39-43
• 4.3.1 CD4~+ CD25~+ T细胞的变化39-41
• 4.3.2 bmDCs细胞表面CD86、CD80分子变化41-43
• 4.4 BALB/C小鼠和PD1/- 小鼠感染模型的建立43-46
• 4.5 JEV-P3感染PD1/- 小鼠及BALB/C小鼠实验46-59
• 4.5.1 CD4~+ T细胞及其表面抑制性分子CTLA-4 的变化47-49
• 4.5.2 DC细胞表面分子CD80及CD86的变化49-51
• 4.5.3 DC细胞表面分子CD274及CD273的变化51-53
• 4.5.4 MDSCs及相关分子的变化53-55
• 4.5.5 细胞因子IL-10的变化55-57
• 4.5.6 细胞因子IL-21的变化57-59
• 5 讨论59-63
• 5.1 DC表面共刺激分子的变化60-61
• 5.2 MDSCS的变化61
• 5.3 细胞因子IL-10的变化61-62
• 5.4 JEV-P3感染小鼠后相关免疫调节62-63
• 结论63-64
• 参考文献64-79
• 致谢79-80

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