鸭补体系统的发育性变化及RA感染的影响

发布时间：2017-10-22 17:04

  本文关键词：鸭补体系统的发育性变化及RA感染的影响

  更多相关文章： 鸭 补体 鸭疫里默氏菌 C3d CR2

【摘要】：鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鸭病称为鸭传染性浆膜炎,该病呈败血症形式,以纤维素性心包炎、肝周炎、脑膜炎、气囊炎和神经症状以及部分病例出现干酪样输卵管炎、结膜炎、关节炎为特征,是养鸭业最为严重的传染病之一,至今几乎存在于所有养鸭地区。该细菌的感染,以发病率和死亡率高、生长性能下降、肉品质量下降、预防和治疗费用增加等造成严重的经济损失。由于RA耐药性严重,菌株的血清型众多且缺乏交叉免疫保护,现有免疫接种和抗菌药物治疗措施在生产中的应用受到一定的限制。补体(complement,C)系统是人和动物固有免疫系统重要的组分之一,不但是机体防御病原体的第一道防线,参与清除“危险信号”,而且在调控炎症反应和免疫应答的过程中也发挥极其重要的作用。补体活性的高低,是动物的补体系统抵抗入侵病原微生物能力大小的标志。检测补体的单个成分及补体的活性测定对于机体免疫系统的功能评价,疾病的诊断与治疗,流行病学调查等均有重要作用。本试验选取四川麻鸭为研究对象,通过建立鸭疫里默氏菌感染模型来研究RA感染前后鸭补体活性的变化、C3d基因和CR2基因的m RNA表达变化及C3d和s CR2蛋白含量的变化,旨在揭示鸭疫里默氏杆菌(RA)感染对鸭补体系统的影响,为进一步研究补体在鸭抗RA感染免疫中的作用奠定基础。本研究的主要结果如下:1.麻鸭RA感染模型的建立实验条件下饲喂的10日龄四川麻鸭腿部皮下注射RA菌液0.2m L/只(1×109cfu/m L),接种后168h内发病率80%、死亡率70%,其中接种后24h出现明显的临床症状、死亡高峰期在36h~60h。病死鸭解剖表现出全身浆膜及各组织器官的被膜纤维素渗出附着,呈现典型的纤维素性心包炎、肝周炎;心脏、肝脏、脾脏充血肿大。2.麻鸭血清补体活性的变化利用溶血素致敏鸡红细胞及固定血清稀释度(1:5)测定麻鸭血清总补体溶血活性。利用1%兔红细胞及固定血清稀释度(1:5)测定血清补体旁路途径溶血活性。麻鸭血清总补体溶血活性1~15d逐渐升高,15~21d趋于稳定并接近成年麻鸭;旁路途径溶血活性1~15d逐渐升高,15~21d趋于稳定并接近成年麻鸭。10日龄麻鸭人工感染RA,血清总补体溶血活性在感染后12~24h升高,且高于对照组;36~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,但都低于对照组。血清旁路途径溶血活性在感染后12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,但都低于对照组。3.麻鸭C3d、CR2 m RNA表达的变化根据Genebank上发表的鸭C3d基因序列(登录号:EU847624.1)、鸭CR2的EST序列(登录号:DR765735.1)设计引物,分别以肝脏和脾脏提取总RNA为模板建立RT-PCR,克隆测序得到四川麻鸭C3d和CR2基因片段分别为991bp和347bp。在NCBI上比对发现四川麻鸭C3d基因与绿头鸭C3d基因相似性达99%,四川麻鸭CR2基因与卷羽鹈鹕CR2基因相似性达90%。依据已获得的C3d、CR2基因序列设计荧光定量PCR引物,以鸭β-actin基因作内参基因,1日龄作对照,采用2-△△Ct法进行C3d、CR2 m RNA的表达分析。麻鸭C3d m RNA在1~12d表达升高,12~21d表达趋于稳定;CR2 m RNA的表达不规律,在1.00~2.87倍之间,3、6、9、12、15、18和21d的表达分别是1d的1.73倍、1.45倍、2.55倍、1.68倍、1.39倍、1.82倍和2.87倍。10日龄麻鸭人工感染RA后,C3d m RNA的表达12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,且都低于对照组;CR2 m RNA的表达在感染后12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,且都低于对照组。4.麻鸭C3d、s CR2蛋白含量的变化根据鸭C3d ELISA试剂盒和鸭可溶性白细胞分化抗原21(CR2/s CD21)ELISA试剂盒操作说明分别测定麻鸭C3d和s CR2的蛋白含量。麻鸭血清中C3d蛋白含量在1~9d平稳,9~15d升高,15~21d趋于稳定;麻鸭s CR2蛋白含量在1~21d处于一个较平稳的水平。10日龄麻鸭人工感染RA后,血清C3d蛋白含量在感染后12~168h比对照组高;s CR2蛋白含量在感染后12~72h高于对照组,而在感染后168h低于对照组。
【关键词】：鸭 补体 鸭疫里默氏菌 C3d CR2
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S834
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第1章 文献综述11-25
• 1.1 补体系统概述11-15
• 1.1.1 补体系统成分的分类11-12
• 1.1.2 补体系统的激活12-14
• 1.1.3 补体激活的生物学效应14-15
• 1.2 补体C3d及其受体CR2的分子特征和功能15-18
• 1.2.1 分子特征16-18
• 1.2.2 C3d、CR2结合的功能18
• 1.3 鸭疫里默氏菌致病机制18-21
• 1.3.1 侵袭力19-20
• 1.3.2 毒素20-21
• 1.4 病原感染对补体系统的影响21-25
• 第2章 引言25-27
• 第3章 鸭补系统的发育性变化及RA感染的影响27-59
• 3.1 材料27-28
• 3.1.1 菌种27
• 3.1.2 试验动物27
• 3.1.3 主要试剂及耗材27
• 3.1.4 主要仪器27-28
• 3.2 试验方法28-39
• 3.2.1 雏鸭感染模型的建立28-29
• 3.2.3 血清补体活性的测定29-31
• 3.2.4 鸭C3d、CR2基因片段的克隆31-36
• 3.2.5 荧光定量PCR36-38
• 3.2.6 C3d和sCR2蛋白含量测定38-39
• 3.3 结果39-54
• 3.3.1 鸭疫里默氏菌感染雏鸭39-41
• 3.3.2 麻鸭血清总补体溶血活性41-43
• 3.3.3 麻鸭血清旁路途径溶血活性43-44
• 3.3.4 麻鸭C3d、CR2基因部分核苷酸序列分析44-45
• 3.3.5 荧光定量PCR引物特异性45-46
• 3.3.6 荧光定量PCR的标准曲线46-48
• 3.3.7 麻鸭C3d mRNA的表达48-49
• 3.3.8 麻鸭CR2 mRNA的表达49-50
• 3.3.9 血清中C3d蛋白含量50-52
• 3.3.10 sCR2的蛋白含量52-54
• 3.4 讨论54-59
• 第4章 结论59-61
• 参考文献61-67
• 附录Ⅰ：英文缩略词表67-69
• 附录Ⅱ：主要溶液及试剂的配制69-71
• 致谢71-73
• 攻读硕士期间论文发表情况73

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 白登良;李明全;李文树;杜文光;任大为;何玉利;;建川杂交鸭肉用性能测定[J];中国家禽;1987年03期

2 张子元;姜小雨;张良才;;樱桃谷鸭与四川麻鸭杂交试验[J];四川畜牧兽医;1989年04期

3 邱祥聘,曾凡同,谢后清,刘福容,郭代荣,张俊康,杨登义,张子元;四川麻鸭野营群牧饲养的食性分析[J];中国畜牧杂志;1980年04期

4 曾凡同;王林全;蒋小松;刘福蓉;邱祥聘;卢永春;赵兴富;;四川麻鸭经济杂交组合比较试验[J];四川农学院学报;1984年02期

5 陈元昌;;四川麻鸭杂交增重显著[J];四川农业科技;1986年01期

6 白登良;李明全;李文树;杜文光;任大为;何玉钊;;建川杂交鸭与四川麻鸭肉用性能对比试验[J];养禽与禽病防治;1987年06期

7 廖德惠;张敏;张化贤;谢镜怀;何明清;郭万柱;肖国海;;四川麻鸭鸭瘟诊断简报[J];四川农业科技;1981年02期

8 夏淑文;陈元昌;;蛋鸭笼养的效益[J];中国家禽;1989年02期

9 黄国清;提高农户饲养肉鸭经济效益的措施[J];中国家禽;1990年02期

10 李安兴,聂奎,曾子建,周继勇;四川麻鸭隐孢子虫病的调查[J];中国兽医科技;1991年09期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 陈斌;鸭α干扰素原（真）核表达及其生物学活性研究[D];四川农业大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 王秀祯;鸭补体系统的发育性变化及RA感染的影响[D];西南大学;2016年

，

本文编号：1079257