ApoCIII引发猪血管内皮细胞炎症反应的分子通路分析

发布时间：2017-10-24 17:40

  本文关键词：ApoCIII引发猪血管内皮细胞炎症反应的分子通路分析

  更多相关文章： ApoCIII 猪 血管内皮细胞 炎症反应 分子通路

【摘要】：血管内皮细胞是构成血管内皮的主要成分,能够保持血管内膜的完整性,从而维持血管的正常功能。血管内皮细胞在生理状态下对血管的舒张与收缩、凝血与抗凝、细胞粘附及血管平滑肌细胞增殖迁移等具有重要的调节作用,其在病理状态下可参与炎症的发生和血栓的形成。血管内皮细胞被激活后,可以分泌大量的炎症因子,对炎症细胞的功能进行调节,从而参与炎症过程。载脂蛋白CIII(Apolipoprotein CIII,Apo CIII)是在肝脏和小肠合成的由79个氨基酸组成的单链多肽,主要存在于乳糜颗粒、极低密度脂蛋白的表面。Apo CIII具有抑制脂蛋白脂酶活性和抑制肝脏富甘油三酯脂蛋白代谢清除等作用,并通过一系列生物学作用最终引起血管再狭窄和动脉粥样硬化的发生。本研究通过在体外培养猪血管内皮细胞过程中添加Apo CIII模拟其引发血管内皮细胞发生炎症反应的过程,并利用深度测序等方法探求Apo CIII引发细胞炎症的关键细胞因子及分子通路。本实验首先体外培养猪主动脉血管内皮细胞,采用实时荧光定量PCR及ELISA法检测添加不同浓度Apo CIII对血管内皮细胞中粘附因子(VCAM-1、ICAM-1)和促炎细胞因子(IL-6、TNF-α)m RNA和蛋白表达水平的影响,筛选出Apo CIII的适宜添加浓度。结果表明添加Apo CIII后血管内皮细胞形态由多角形变为梭形,且添加浓度为50μg/ml时能显著上调ICAM-1、VCAM-1 m RNA表达水平,细胞培养上清中IL-6和TNF-α的蛋白表达水平也显著增加。随后,利用高通量测序技术筛选出Apo CIII刺激前后的差异表达基因,并采用实时荧光定量PCR验证测序的结果。结果表明,Apo CIII处理组的血管内皮细胞中共有647个差异表达基因与未处理组相比差异显著,包括390个上调表达基因和257个下调表达基因。Pathway分析结果显示差异基因主要涉及免疫应答、炎症反应等信号通路,其中MAPK通路涉及21个基因。最后,进一步通过Western blot检测Apo CIII对MAPK信号通路相关信号因子磷酸化水平的影响,并通过ELISA法检测MAPK抑制剂与Apo CIII共同处理血管内皮细胞后,细胞培养上清中IL-6、TNF-α蛋白表达水平的变化。Western blot结果表明Apo CIII促进血管内皮细胞中ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化;ELISA检测结果表明ERK1/2抑制剂与p38 MAPK抑制剂处理血管内皮细胞后,IL-6和TNF-α蛋白表达水平均降低。这些结果为进一步解析Apo CIII引发血管内皮细胞炎症反应的作用机制提供了理论依据。
【关键词】：ApoCIII 猪 血管内皮细胞 炎症反应 分子通路
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-13
• 引言13-14
• 第一篇 文献综述14-25
• 第1章 载脂蛋白CIII研究进展14-19
• 1 载脂蛋白CIII概述14-16
• 2 载脂蛋白CIII的生物学功能16-17
• 3 载脂蛋白CIII与相关疾病17-19
• 第2章 血管内皮细胞19-25
• 1 血管内皮细胞的来源19
• 2 血管内皮细胞的功能19-21
• 3 血管内皮细胞与炎症21-25
• 第二篇 研究内容25-49
• 第1章 不同浓度Apo CIII对猪主动脉血管内皮细胞炎症反应的影响25-34
• 1 材料与方法25-30
• 2 结果30-32
• 3 讨论32-33
• 4 小结33-34
• 第2章 Apo CIII刺激猪主动脉血管内皮细胞差异表达基因的研究34-43
• 1 材料与方法34-38
• 2 结果38-41
• 3 讨论41-42
• 4 小结42-43
• 第3章 MAPK信号通路在Apo CIII引发炎症反应中的关键作用43-49
• 1 材料与方法43-46
• 2 结果46-47
• 3 讨论47-48
• 4 小结48-49
• 结论49-50
• 参考文献50-60
• 导师简介60-61
• 作者简介61-62
• 致谢62

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本文编号：1089839