神经肽Y（NPY）及其受体在母鸡生殖道的分布研究

发布时间：2017-10-26 21:26

  本文关键词：神经肽Y（NPY）及其受体在母鸡生殖道的分布研究

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【摘要】：在母鸡输卵管子宫阴道交接部及漏斗部存在一特殊的管状腺,能够使鸡精子长期存活并保持受精能力,因其具有长期贮存精子的能力,而被称为贮精腺,前期研究表明,NPY基因是禽类子宫阴道交接部的差异表达基因,推测母鸡生殖道中的NPY可能参与调控精子活力。本试验利用免疫组织化学法检测NPY、NPY受体(NPY1R和NPY5R)在产蛋期母鸡生殖道的分布,结果表明NPY和NPY1R在母鸡生殖道的表达比较一致,NPY和NPY1R在漏斗部、峡部、膨大部及子宫的粘膜上皮均有表达,且NPY在漏斗部粘膜上皮阳性信号最强,其次为膨大部和峡部,而NPY1R在膨大部和峡部粘膜上皮的阳性信号最强。用鸡NPY及其受体NPY1R和NPY5R的保守区设计特异性引物,内参基因选择鸡β-actin基因,利用荧光定量分析鸡NPY基因及其受体NPY1R、NPY5R在母鸡输卵管漏斗部、膨大部、峡部、子宫、子宫阴道交接处及阴道的表达。结果发现,NPY在峡部及阴道部的表达量显著高于输卵管其他部位(P0.05);NPY1R在阴道部的表达量显著高于输卵管其他部位(P0.05);NPY5R在子宫阴道交接部和阴道的表达量显著高于输卵管其他部位(P0.05)。根据GenBank上公布的鸡NPY序列合成符合毕赤酵母密码子偏好性的NPY基因,并连接至真核表达载体pPICZαA中,将重组质粒电转至毕赤酵母菌GS115中,用终浓度为1%的甲醇进行诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blot检测,结果表明重组酵母菌成功分泌鸡NPY蛋白,大小约为35kDa。
【关键词】：神经肽Y NPY1R NPY5R 免疫组织化学 荧光定量PCR 毕赤酵母
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 缩略词表(Abbreviation)9-11
• 1 文献综述11-21
• 1.1 神经肽Y（NPY）及其受体研究进展11-14
• 1.1.1 NPY的研究进展11-12
• 1.1.2 NPY1R的研究进展12-13
• 1.1.3 NPY5R的研究进展13-14
• 1.2 毕赤酵母表达系统的研究进展14-20
• 1.2.1 蛋白表达系统14-15
• 1.2.2 酵母表达系统15
• 1.2.3 巴斯德毕赤酵母表达系统15-20
• 1.3 本研究的目的和意义20-21
• 2 NPY及其受体在母鸡生殖道的表达21-28
• 2.1 前言21
• 2.2 试验材料21-22
• 2.2.1 试验动物21
• 2.2.2 主要药品及试剂21
• 2.2.3 常用试剂的配制21-22
• 2.2.4 主要仪器22
• 2.3 试验方法22-23
• 2.3.1 石蜡包埋22
• 2.3.2 制备石蜡切片22
• 2.3.3 免疫组化步骤22-23
• 2.4 结果分析23-27
• 2.5 讨论27-28
• 3 NPY及其受体在母鸡输卵管不同部位的表达28-37
• 3.1 前言28
• 3.2 材料与方法28-31
• 3.2.1 试验材料28-29
• 3.2.2 试验方法29-31
• 3.3 结果分析31-35
• 3.3.1 总RNA的提取与检测31-32
• 3.3.2 NPY基因PCR条件的确定32
• 3.3.3 NPY1R基因PCR条件的确定32-33
• 3.3.4 NPY5R基因PCR条件的确定33
• 3.3.5 NPY基因荧光定量结果33-34
• 3.3.6 NPY1R基因荧光定量结果34
• 3.3.7 NPY5R基因荧光定量结果34-35
• 3.4 讨论35-37
• 4 NPY在毕赤酵母中的表达37-58
• 4.1 前言37
• 4.2 材料与方法37-53
• 4.2.1 材料37-41
• 4.2.2 试验方法41-53
• 4.3 结果与分析53-56
• 4.3.1 重组表达质粒的构建53-54
• 4.3.2 重组质粒线性化检测54-55
• 4.3.3 阳性转化子的PCR鉴定55
• 4.3.4 Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测结果55-56
• 4.3.5 蛋白浓度检测结果56
• 4.4 讨论56-58
• 5 结语58-59
• 5.1 全文总结58
• 5.2 进一步研究内容58-59
• 参考文献59-66
• 附录Ⅰ 关键词索引66-67
• 致谢67

【参考文献】

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1 杨亚娟;毕赤酵母（P.Pastoris）的rhIL-1表达量与载体—受体相关性研究[D];河南师范大学;2014年

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本文编号：1100485