白绒山羊PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对肌内脂肪细胞增殖分化的影响

发布时间：2017-10-27 21:16

  本文关键词：白绒山羊PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对肌内脂肪细胞增殖分化的影响

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【摘要】：本研究以绒山羊肌内脂肪细胞为试验材料,通过靶向阻断过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ基因,建立稳定干扰的肌内脂肪细胞株,探讨绒山羊PPARγ基因在肌内脂肪细胞增殖和分化过程中的功能。采用慢病毒质粒包装系统构建特异靶向白绒山羊PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的肌内脂肪细胞株。利用实时定量和Western blot方法检测PPARγ基因在干扰组和对照组不同时间点的表达情况,并通过MTT和油红O染色法研究绒山羊PPARγ基因对肌内脂肪细胞增殖和分化的影响。经测序证实合成的含PPARγ-shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确,对肌内脂肪细胞的感染效率为80%以上,荧光定量和Western blot检测慢病毒介导的shRNA可以有效降低PPARγ的表达,其mRNA和蛋白水平作用的时间相隔24h。沉默PPARγ基因后,脂肪细胞内甘油三脂的浓度明显低于对照组,相反MTT检测干扰组中细胞增殖能力高于对照组。本研究构建了绒山羊shRNA-PPARγ慢病毒干扰载体,成功转染至肌内脂肪细胞后可明显抑制脂肪细胞的分化,而促进肌内脂肪细胞的增殖,为进一步研究PPARγ基因在绒山羊脂肪细胞代谢通路中的作用及脂肪沉积机制奠定基础。
【作者单位】： 内蒙古医科大学附属医院妇产科生殖医学中心;内蒙古农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖自治区重点实验室;
【关键词】： 肌内脂肪细胞 RNA干扰 PPARγ
【基金】：国家自然科学基金(30960246) 内蒙古自然科学基金(2010Zd11) 国家科技支撑项目(2011BAD28B05) 国家绒毛用羊现代农业产业技术体系(CARS-40-05)
【分类号】：S827
【正文快照】： 肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)是脂肪沉积的一种主要形式,具有一般脂肪所具有的特点。肌内脂肪直接参与了肉质嫩度、风味和多汁性的形成[1]。脂肪细胞是研究脂肪形成的理想模型,体外培养前体脂肪细胞不仅能完整的认识脂肪组织发生、增殖和分化的全过程,同时可以直接观察各

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