四川地区HPS与CSFV、PRV混合感染调查及HPS四川分离株质粒介导的β-内酰胺类耐药基因检测

发布时间：2017-10-28 07:32

  本文关键词：四川地区HPS与CSFV、PRV混合感染调查及HPS四川分离株质粒介导的β-内酰胺类耐药基因检测

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【摘要】：副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是正常猪群上呼吸道的一种共栖菌,但其在特定条件下可侵入机体并引起全身性疾病,是目前影响养猪业的重要细菌病之一。本研究对四川省副猪嗜血杆菌、猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV)和伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)病原混合感染进行检测,并对副猪嗜血杆菌四川分离株进行p-内酰胺类抗生素的药敏实验和质粒介导的p-内酰胺类耐药基因检测,为四川地区副猪嗜血杆菌病的防控提供科学依据。主要研究结果如下：1.四川地区HPS与CSFV、PRV混合感染调查对四川18个不同地区的75份分离出副猪嗜血杆菌且临床症状表现为疑似感染CSFV和PRV的病猪组织,分别提取组织RNA和DNA进行RT-PCR和PCR检测。检测结果显示,HPS和CSFV混合感染率为37.3%(28/75)；HPS和PRV混合感染率为16.0%(12/75)；HPS与CSFV和PRV混合感染率为9.3%(7/75)。结果表明四川地区这三种病的交叉混合感染比较严重。2.HPS四川分离株质粒介导的β-内酰胺类耐药基因检测分别采用纸片法和PCR方法,对97株HPS四川分离株的5种p-内酰胺类药物耐药情况以及5种质粒介导的p-内酰胺类耐药基因携带情况进行检测。结果表明,分离株中耐药菌株比例高达86.6%(84/97)；分离株对氨苄西林、阿莫西林、青霉素、头孢噻肟、先锋霉素V的耐药率分别为63.9%(62/97)、56.7%(55/97)、74.2%(72/97)、37.1%(36/97)、29.9%(29/97),且多重耐药情况比较严重；86.6%(84/97)分离株的质粒携带至少一种耐药基因,基因TEM、SHV、CTX、OXA、DHA的检出率分别为57.7%(56/97)、33.0%(32/97)、17.5%(17/97)、19.6%(19/97)、2.1%(2/97),有32株分离株携带2-3种耐药基因；耐药基因型和耐药表型的符合率为88.1%(74/84)。结果表明,副猪嗜血杆菌四川分离株对p-内酰胺类抗生素严重耐药,其质粒介导的p-内酰胺类耐药基因携带率较高。此外,耐药基因型和表型的高符合率,表明通过检测耐药基因型来初步确定耐药菌株切实可行。
【关键词】：副猪嗜血杆菌 混合感染 质粒 β-内酰胺类抗生素 耐药基因
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 缩略词表7-11
• 第一章 文献综述11-19
• 1 副猪嗜血杆菌病的研究11-13
• 1.1 病原学11
• 1.2 流行病学11-12
• 1.3 临床症状与病理变化12
• 1.4 诊断方法12
• 1.5 防治12-13
• 2 HPS与其他疾病混合感染研究13-15
• 2.1 HPS与CSFV的混合感染研究13
• 2.2 HPS与PRV的混合感染研究13-14
• 2.3 HPS与CSFV、PRV的混合感染研究14
• 2.4 HPS与其他病毒的混合感染研究14-15
• 2.5 HPS与细菌的混合感染研究15
• 3 HPS耐药性研究15-18
• 3.1 HPS药物敏感性研究15-16
• 3.2 HPS耐药基因研究16-18
• 4 本研究的目的与意义18-19
• 第二章 四川地区HPS与CSFV、PRV混合感染情况调查19-29
• 1 实验材料19-20
• 1.1 病料来源19
• 1.2 主要试剂19-20
• 1.3 主要设备20
• 2 实验方法20-22
• 2.1 HPS与CSFV混合感染调查20-21
• 2.2 HPS与PRV混合感染调查21-22
• 3 实验结果22-25
• 3.1 CSFV的RT-PCR鉴定结果22-23
• 3.2 PRV的PCR鉴定结果23
• 3.3 HPS与CSFV、PRV混合感染情况23-25
• 4 讨论25-29
• 4.1 CSFV检测结果分析25-26
• 4.2 PRV检测结果分析26-27
• 4.3 混合感染情况分析27-29
• 第三章 四川地区HPS质粒介导的β-内酰胺类耐药基因检测29-41
• 1 实验材料29-30
• 1.1 菌株29
• 1.2 主要试剂29-30
• 1.3 主要培养基制备30
• 1.4 主要仪器30
• 2 实验方法30-32
• 2.1 菌株复苏30-31
• 2.2 β-内酰胺类抗生素敏感性检测(纸片法)31
• 2.3 质粒小提31
• 2.4 质粒耐药基因PCR检测31-32
• 3 实验结果32-39
• 3.1 耐药表型检测结果32-35
• 3.2 质粒介导的β-内酰胺类耐药基因检测结果35-38
• 3.3 多重耐药情况38-39
• 3.4 耐药表型与基因型符合情况39
• 4 讨论39-41
• 第四章 结论41-42
• 参考文献42-52
• 致谢52-53
• 附录一 副猪嗜血杆菌药敏结果和耐药基因检测结果53-57
• 攻读学位期间发表的学术论文57

【参考文献】

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本文编号：1107263