uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞增殖与凋亡的影响

发布时间：2017-11-02 13:06

  本文关键词：uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞增殖与凋亡的影响

  更多相关文章： 牛卵丘颗粒细胞 尿激酶型纤溶酶原激活剂 尿激酶型纤溶酶原激活剂受体 增殖 凋亡

【摘要】：尿激酶型纤溶酶激活剂与其受体(uPA/uPAR系统)在正常组织或细胞生理与生殖活动中具有重要作用。但是uPAR在牛卵泡细胞中的表达以及uPA在牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex, COCs)成熟过程中表达的意义和作用尚少见报道。本研究利用免疫细胞荧光化学、细胞培养、细胞增殖/凋亡/细胞周期检测等多种技术,探讨了uPA和uPAR在卵丘颗粒细胞上表达情况以及两者在调节体外培养的牛卵丘颗粒细胞增殖与凋亡过程中可能的互作机制。结果显示,①uPA和uPAR蛋白在牛卵丘颗粒细胞上都有表达；② 0.5 ng/mL uPA和1μg/mL Amiloride(uPA活性抑制剂)能分别显著增加或者抑制细胞增殖；③在培养48 h和72 h,uPA能显著促进细胞增殖,同时uPAR抗体添加显著阻断了uPA对牛卵丘颗粒细胞增殖的促进作用；④Amiloride与uPAR抗体能显著增加处于S和G2/M期的细胞比率,且对细胞凋亡没有影响。本研究推测,体外培养的牛卵丘颗粒细胞可能通过自分泌途径,实现uPA与锚定于自身细胞膜外的uPAR结合,进而促进细胞的增殖。uPA活性或者uPAR功能被阻断后,卵丘颗粒细胞增殖被抑制,其原因可能在于细胞被阻断在G2-M或者中-后期检验点,而与细胞凋亡无关。本研究结果对于进一步深入理解牛卵泡发育与闭锁机制有重要意义。
【关键词】：牛卵丘颗粒细胞 尿激酶型纤溶酶原激活剂 尿激酶型纤溶酶原激活剂受体 增殖 凋亡
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823
【目录】：

• 摘要4-5
• abstract5-10
• 缩略语表10-11
• 1 引言11-20
• 1.1 卵丘细胞的形成11
• 1.2 卵丘细胞对于卵母细胞的发育与成熟的功能11-12
• 1.3 uPA/uPAR系统的概述12-14
• 1.3.1 尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的功能12
• 1.3.2 尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)结构12-13
• 1.3.3 尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物受体(uPAR)功能13
• 1.3.4 尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物受体(uPAR)的结构13-14
• 1.3.5 uPA/uPAR系统的研究进展14
• 1.4 卵丘细胞增殖与卵泡成熟的关系14-17
• 1.4.1 原始卵泡14
• 1.4.2 生长卵泡14-16
• 1.4.3 成熟卵泡16
• 1.4.4 卵丘细胞对卵母细胞成熟的作用及影响16-17
• 1.5 uPA/uPAR系统与卵丘的关系17-18
• 1.6 细胞的周期和凋亡18-19
• 1.7 研究目的及意义19-20
• 2 实验材料与方法20-29
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 实验仪器20
• 2.1.2 实验试剂20
• 2.1.3 实验材料20-21
• 2.2 实验方法21-29
• 2.2.1 带有片层状壁颗粒细胞的卵丘-卵母复合体的获得21
• 2.2.2 卵丘颗粒细胞的收集和体外培养21
• 2.2.3 免疫荧光染色21-23
• 2.2.4 uPA、Amiloride和uPAR ant ibody在细胞培养中的增殖影23-25
• 2.2.5 检测uPA、Amiloride和uPAR antibody对细胞周期的影响25
• 2.2.6 检测uPA、Amiloride和uPAR antibody对细胞凋亡的影响25-29
• 3 实验结果与分析29-38
• 3.1 细胞的培养29
• 3.2 牛卵丘颗粒细胞的生长曲线29-30
• 3.3 uPA和uPAR蛋白在培养牛卵丘颗粒细胞中的表达30-31
• 3.4 uPA和Amiloride对培养卵丘颗粒细胞增殖的影响31-33
• 3.4.1 uPA对牛卵丘颗粒细胞增殖的影响31
• 3.4.2 Amiloride对牛卵丘颗粒细胞增殖的影响31-32
• 3.4.3 uPA与Amiloride联合添加对牛卵丘颗粒细胞增殖的影响32-33
• 3.4.4 uPA与uPAR抗体联合添加对牛卵丘颗粒细胞增殖的影响33
• 3.5 uPA、Amiloride和uPAR antibody对细胞周期的影响33-35
• 3.6 uPA、Amiloride和uPAR antibody对牛卵丘颗粒细胞凋亡的影响35-38
• 3.6.1 uPA和Amiloride对牛卵丘颗粒细胞凋亡的影响35-36
• 3.6.2 uPA和uPAR antibody对牛卵丘颗粒细胞凋亡的影响36-38
• 4 实验讨论38-41
• 4.1 牛卵丘颗粒细胞体外培养的一般特征38
• 4.2 uPA与uPAR在卵丘颗粒细胞上的表达情况38-39
• 4.3 uPA和Amiloride对卵丘颗粒细胞增殖的影响39
• 4.4 uPA和uPAR antibody对卵丘颗粒细胞的增殖影响39-40
• 4.5 uPA、Amiloride和uPAR antibody对细胞周期的影响40
• 4.6 uPA、Amiloride和uPAR antibody对细胞凋亡的影响40-41
• 5 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-48
• 作者简介48

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本文编号：1131660