沼泽型水牛VASA基因启动子的克隆及转录活性检测

发布时间：2017-11-03 12:17

  本文关键词：沼泽型水牛VASA基因启动子的克隆及转录活性检测

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【摘要】：【目的】克隆沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列,对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测,为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′侧翼序列,经过同源比对,设计PCR引物。以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增VASA基因5′侧翼序列并进行测序和生物信息学分析。将扩增的VASA基因5′侧翼片段插入pEGFP-1多克隆位点处,构建pVASA-EGFP-1载体。载体经脂质体转染HEK-293T和CHO细胞系,分析其转录活性。【结果】成功克隆沼泽型水牛VASA 5′侧翼序列及部分CDS区序列,共3 081bp,同源性分析表明,沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列与河流型水牛、黄牛、绵羊、山羊、小鼠和人的相似性分别为99%,96%,93%,95%,90%和79%。对其5′侧翼序列2 000bp进行启动子预测及转录因子结合位点预测,发现在其翻译起始位点上游-635--586处存在TATA box,启动子区存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子结合位点,其中Stat家族基因在VASA启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个Stats基因结合的情况。水牛VASA启动子能启动EGFP在HEK-293T细胞中的表达,但非常微弱;能启动EGFP在CHO细胞中表达,且启动活性与CMV启动子相似。【结论】成功克隆了沼泽型水牛VASA基因启动子,分析了其启动子序列特征并成功验证其组织特异性和转录活性。
【作者单位】： 中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室;
【关键词】： 沼泽型水牛 VASA基因 生物信息学分析 转录活性
【基金】：农业部转基因重点项目(2014ZX08010-012B) 广西科技攻关国际交流与合作项目(桂科合14123001-5) 广西水牛研究所基本业务费项目(水牛基160206)
【分类号】：S823.83;Q78
【正文快照】： 水牛具有适应性强、耐高温高湿、耐粗饲、抗病力强、使用年限长、静默发情、繁殖力低和产奶量低等生物学特点,非常适合于我国南方地区养殖[1-2]。近年来,随着生活水平的提高,人们对水牛肉和水牛奶的需求日益增加,但是水牛繁殖力低严重制约了该产业的发展,而造成这一现状的主要，

本文编号：1136158