牛布鲁氏菌病荧光标记免疫层析试纸条检测技术研究

发布时间：2017-11-05 20:09

  本文关键词：牛布鲁氏菌病荧光标记免疫层析试纸条检测技术研究

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【摘要】：布鲁氏菌病是一种流行范围广、危害严重的人畜共患传染病。近年来,由布鲁氏菌感染导致的人畜疫情在国内外均出现回升势头,严重影响了养殖产业发展,并引发严重的公共卫生问题。该病的快速准确检测可为疫病防治提供有效的疫病信息,是布鲁氏菌病早期防控的关键。鉴于此,建立一种快速和有效的检测方法十分必要。首先将布鲁氏菌pCold-TF/OMP19、pCold-TF/OMP22和pCold-TF/OMP28重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞进行表达,通过亲和层析纯化,获得高纯度可溶性重组蛋白OMP19、OMP22和OMP28。然后采用ELISA方法对这三种重组蛋白进行验证,表明三种蛋白组合能与牛布鲁氏菌病标准阳性血清发生较好的特异性反应；之后,利用纯化的融合抗原,通过对各种固相材料的选择和反应体系及反应条件的优化,建立了一种基于荧光标记抗体的牛布鲁氏菌病免疫层析试纸条检测方法,并应用于牛布鲁氏菌病抗体的快速检测中。荧光标记的牛布鲁氏菌病免疫层析试纸条最低能检测到1：100的稀释度；与牛的结核病、蓝舌病、病毒性腹泻、口蹄疫、巴氏杆菌病、白血病,不发生交叉反应；应用该试纸条与商品化的IDEXX试剂盒对200份临床样本进行检测比较,结果与IDEXX试剂盒的符合率为93.5%。本试验建立的牛布鲁氏菌病荧光标记免疫层析试纸条方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,能快速检测出牛血清中的布鲁氏菌病抗体,是一种适合现场初筛的检测方法。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.23

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本文编号：1145670