用豚鼠感染模型筛选副猪嗜血杆菌弱毒菌株

发布时间：2017-11-06 04:12

  本文关键词：用豚鼠感染模型筛选副猪嗜血杆菌弱毒菌株

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【摘要】：副猪嗜血杆菌(Hamophilus parasuis,HPS)属于巴斯德菌科嗜血杆菌属成员,是猪格拉泽氏病的主要病原菌,至少有15种血清型,主要引起猪的全身性感染,常见的临床症状表现为多发性纤维素性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等,给全世界养猪业造成重大经济损失。目前主要的防治手段是依靠抗生素和灭活疫苗,但常规灭活疫苗保护力不够、成本高、副反应较大,对不同血清型HPS的交叉保护率也较低,而弱毒活疫苗保护期长、使用成本较低,并可诱导交叉保护。因此筛选该菌的弱毒疫苗候选菌株是开发新型疫苗的有效途径。本实验室将HPS在37℃和40℃条件下分别获得了250代菌株,作为筛选弱毒疫苗的候选菌株。本论文建立了HPS的豚鼠感染模型,并用该模型初步检测了HPS传代菌株的毒力。主要研究结果如下:1.HPS豚鼠感染模型的研究:在本试验中采用鼻腔感染和腹腔感染两种接种方式。鼻腔感染试验中,分为3个剂量组,每组3只豚鼠,分别鼻腔接种副猪嗜血杆菌SH0165菌株6.69×109CFU、2.23×109CFU和5.58×108CFU的菌量;在腹腔感染试验中,也分3个实验组,每组6只豚鼠,分别接种的副猪嗜血杆菌SH0165的剂量为4.83×109CFU、1.93×109CFU和4.83×108CFU的菌量。试验结果显示,在鼻腔感染试验组中,豚鼠感染后几个小时内开始出现精神沉郁、厌食等症状,但3d后都恢复健康,最终3个剂量组的豚鼠都没有死亡。7d后剖检观察豚鼠的组织病变,其中只有6.69×109CFU剂量组的豚鼠能观察到较为明显的全身出血症状,其他剂量组豚鼠的病变都不明显。同时各个感染剂量组之间的组织器官病变差异性也难以区分和量化。在腹腔感染试验中,豚鼠感染后几个小时内出现精神沉郁、呼吸困难、移动迟缓、食欲废绝等症状,接着出现死亡。最终7d内4.83×109CFU剂量组的6只豚鼠死亡了5只,中间剂量组中死亡了2只,而最低剂量组中没有豚鼠死亡。死亡的豚鼠剖检后能观察到比较明显的败血症、纤维素性浆膜炎和胸腹腔积液等临床症状。在组织载菌量测定试验中,也能在全身主要器官分离到该种病原菌。同时后续的豚鼠血常规检测、血生化鉴定、组织病理切片和HE染色等试验也进一步证明了副猪嗜血杆菌能对豚鼠造成实质性的伤害。以上结果也证明了豚鼠可以作为副猪嗜血杆菌感染的模型动物。在此基础上建立了关于豚鼠腹腔感染副猪嗜血杆菌的相关评价指标和方法,用于评估传代菌株的毒力强弱。2.HPS弱毒菌株的初步筛选:将副猪嗜血杆菌SH0165菌株分别在37℃和40℃条件下连续液体传代至200代。而后分别选取37℃和40℃条件传代的第100代、150代、200代共6个代次的菌株,用2×LD50的菌量腹腔感染豚鼠。结果显示37℃条件下传代的菌株感染豚鼠后,豚鼠的死亡率随代次数的增加而下降;40℃传代条件下的菌株感染豚鼠后,豚鼠死亡情况没有规律。用相应的评判标准评价感染豚鼠的病理变化程度,得到的评分结果显示37℃条件下菌株的毒力整体上呈减弱的趋势,40℃条件下菌株毒力减弱的不明显。37℃条件第200代的菌株可以作为弱毒菌株的候选。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61

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本文编号：1147281