盐碱化羊草草地固氮微生物的特性研究

发布时间：2017-11-08 12:49

  本文关键词：盐碱化羊草草地固氮微生物的特性研究

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【摘要】：盐碱化草地土壤中存在数量较多的能够独立进行固氮作用的自生固氮菌,这些细菌在土壤氮循环中的作用一直受到广泛的关注。本研究利用改良Ashby无氮培养基平板,从松嫩盐碱化草地带有羊草凋落物的表层土壤样品中分离出10株自生固氮菌株,通过形态学分析、生理生化反应及16SrDNA序列分析等试验对菌株进行鉴定,并对菌株固氮酶等酶活、促生特性以及优势菌株对羊草的促生作用进行研究。研究结果如下:1、通过形态学分析、生理生化特征分析及16SrDNA核酸序列分析,对筛选得到的10株自生固氮菌进行鉴定,初步确定为四株链霉菌(Streptomyces),两株假单胞菌(Pseudomonas),一株土地戈登氏菌(Gordonia terrae),一株鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii),一株新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum),一株根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)。菌株Genbank核酸序列登录号分别为KJ716539、KJ742897-KJ742905。全部菌株具有耐盐碱性,可在Na Cl为4%和pH为10.5的培养基中生长良好;硫化氢试验、接触酶试验阳性;大多数菌株明胶液化试验、淀粉水解试验、糖发酵试验呈阳性,全部菌株均能在以绝大多数糖类为唯一碳源的培养基上生长。2、对分离菌株的固氮酶活性进行研究,利用乙炔还原法进行测定,通过气象色谱仪对乙烯相对生成量的检测证明所有菌株均具有固氮酶活性,酶活区间为2.21-4.44nmol C2H4 h-1m L-1。3、对分离菌株产CMC酶活性研究,以CMC和秸秆分别作为底物,通过二硝基水杨酸法对还原糖生成量进行测定,实验结果表明Sn-15、Sn-21、Sn-22、Sn-23、Sn-26具有纤维素水解酶活性,而且当底物是秸秆时纤维素酶活性明显高于以CMC为底物时的纤维素酶活性。4、对分离菌株产木聚糖酶能力研究,利用DNS显色法进行测定。结果表明,Sn-15、Sn-21、Sn-22、Sn-23、Sn-265株菌产木聚糖酶,其中Sn-23、Sn-26两株链霉菌木聚糖酶活性相对较高。5、对分离菌株促生特性进行研究,实验结果显示,Sn-19、Sn-20、Sn-23具有溶磷能力;所有菌株都能产生IAA,Sn-23产量最高;抑菌活性测定结果显示,Sn-15、Sn-18、Sn-21、Sn-23、Sn-26在金黄色葡萄球菌作为指示菌株时产生抑菌圈,其中Sn-18抑菌效果最好;Sn-15、Sn-22、Sn-23菌株在以大肠杆菌为指示菌株时抑菌效果明显,且Sn-22效果最好。6、对分离菌株的羊草促生特性进行研究,分别以中性山地土和盐碱化草地土进行羊草盆栽实验,采用菌种为Sn-5和外源碱性菌。实验结果表明外源性碱性菌在pH=9,100mmol[Na+]的条件下对羊草生长促生效果最好,山地土盆栽实验中Sn-5没有表现出促生作用;在盐碱化草地土壤盆栽实验中,Sn-5和外源碱性菌均表现出良好的促生作用。
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S812.2

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本文编号：1157137