SREBP1基因在水牛乳腺上皮细胞中的功能研究

发布时间：2017-11-09 06:13

  本文关键词：SREBP1基因在水牛乳腺上皮细胞中的功能研究

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【摘要】：水牛奶较荷斯坦牛奶具有更丰富的蛋白质、脂肪、维生素等营养物质,是人类生活的理想食品。固醇调节元件结合蛋白1(Sterol regulatory element-binding protein 1. SREBP1)是人和动物乳脂肪合成的核心转录因子,主要通过调控参与乳脂肪合成的多种酶和转运蛋白的表达活性,影响乳腺上皮细胞甘油三脂的合成和分泌。本研究利用qRT-PCR技术证实乳脂肪球(milk fat globule, MFG)能够用于体内乳腺上皮细胞基因的表达研究；利用RNAi技术和脂肪酸处理方法证明SREBP1基因参与了乳脂肪合成过程中各种酶和转运蛋白的调控,SREBP1基因可能作用于ERK1/ERK2信号通路从而调控PPAR y基因的表达。本研究为进一步探讨水牛乳脂肪合成的分子机制提供了理论依据。获得的主要研究结果如下：1.MFG中的总RNA主要来源于乳腺上皮细胞,且可以用于体内乳腺上皮细胞功能基因的表达研究。在MFG、乳汁体细胞(MSC)、乳腺组织(MG)转录本的对比中,脂肪细胞特异基因(AdipoQ),白细胞特异基因(CSF1、ILla、CD43)在MFG中没有表达；上皮细胞标志基因(Keratin 8、Keratin 18)的表达高于MSC但低于MG;成纤维细胞标志基因(vimentin)在MFG中的表达低于MSC和MG;乳蛋白基因(LALBA、BLG、CSN2)和乳脂肪合成相关基因(ACACA、 BTN1A1、FABP3、FAS)在MFG中的表达均高于MSC和MG。2.利用乳脂肪球为材料成功克隆出SREBP1和PPARγ基因CDS全序列,长度分别为3438bp和1428bp。3.本研究成功分离了乳腺上皮细胞并进行了传代。分离的乳腺上皮细胞具有典型的鹅卵石样形态,出现圆屋顶样、乳头样结构,能够分泌乳滴,生长曲线呈现典型的S型,免疫细胞化学证明具有角蛋白18和波形蛋白的表达。4. SREBP1基因参与了乳脂肪合成过程中各种的酶和转运蛋白的调控。研究发现shRN A-SREB P1慢病毒颗粒感染水牛乳腺上皮细胞后,SREBP1基因下调45%,培养基中甘油三酯浓度极显著高于阴性感染组(P0.01)。脂肪酸处理乳腺上皮细胞后发现,添加油酸组或硬脂酸组培养基中甘油三酯浓度极显著高于对照组(P0.01),软脂酸组极显著低于对照组(P0.01)；油红O染色结果显示油酸和硬脂酸能够抑制乳腺上皮细胞脂滴的生成,软脂酸能够促进脂滴的生成；qRT-PCR结果显示SREBP1基因在油酸组和硬脂酸组的表达下调,在软脂酸组表达上调。经过shRNA-SREBP1慢病毒颗粒感染和脂肪酸处理后,ACACA、FABP3、FAS、SCD、ERK1、ERK2、PPARγ、Insig1基因表达量与SREBP1基因表达趋势一致。这表明SREBP1基因是乳脂肪合成调控的核心调控因子,SREBP1基因可能作用于ERK1/ERK2信号通路从而调控PPAR γ基因的表达。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823.83

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本文编号：1160625