海藻糖对奶山羊睾丸组织冷冻保存效果的影响

发布时间：2017-11-09 13:32

本文关键词：海藻糖对奶山羊睾丸组织冷冻保存效果的影响

【摘要】：睾丸组织冷冻保存是一项正在逐步发展的现代繁殖技术,其为动物种质资源的保存提供了新的方法和思路。海藻糖是一种具有抗冷冻、抗高渗和低毒性的非还原糖,已广泛应用于组织和细胞的冷冻保存技术中。然而,关于海藻糖对奶山羊睾丸组织冷冻保存效果的影响未见相关报道。为探索适宜用于奶山羊睾丸组织冷冻保存的渗透性冷冻保护剂以及海藻糖对奶山羊睾丸组织冷冻保存效果的影响,本研究将关中奶山羊睾丸切碎后分别冷冻保存于含有不同浓度二甲基亚砜(DMSO)、甘油和丙二醇的冷冻保护液中,于冻存前后,分别测定奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力,筛选出适宜用于奶山羊睾丸组织冷冻保存的渗透性冷冻保护剂及其适宜浓度。然后,在筛选出的基础冷冻保护液中添加不同浓度的海藻糖,于冻存前后,分别测定奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力;冻存后睾丸组织体外培养后收集培养液测定培养液中的睾酮含量;制作石蜡组织切片观察冻存前后睾丸组织的形态结构;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色检测冻存前后睾丸组织细胞的凋亡情况;检测冻存前后睾丸组织的总抗氧化(T-AOC)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量和丙二醛(MDA)含量等抗氧化能力相关指标;运用real-time PCR检测冻存前后睾丸组织Bax、Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因的表达量。本研究主要获得如下结果:1.与新鲜睾丸组织相比,冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力显著下降(P0.05)。在冷冻保护液中添加DMSO时,冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力分别高于甘油组和丙二醇组。在冷冻保护液中添加丙二醇时,冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力显著高于甘油组(P0.05)。同时,在冷冻保护液中添加10%DMSO时,冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力最高,分别为66.41%、66.76%和65.87%。2.与对照组相比,添加不同浓度海藻糖的冷冻保护液能够显著提高冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力(P0.05)。同时,在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织的总细胞活力、间质细胞活力和小管上皮细胞活力显著高于其他试验组(P0.05)。在冷冻保护液中添加海藻糖对奶山羊睾丸组织的睾酮分泌能力有一定的保护作用,并且在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,睾酮分泌能力显著高于其他试验组(P0.05)。另外,冷冻保存过程对奶山羊睾丸组织的组织结构有一定的破坏作用。在冷冻保护液中添加海藻糖能够保护奶山羊睾丸组织结构的完整性,同时,在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,其对于睾丸组织结构完整性的保护作用较好。冷冻保存过程会引起奶山羊睾丸组织细胞的凋亡。与对照组相比,在冷冻保护液中添加海藻糖能显著降低睾丸组织中凋亡细胞的数量(P0.05)。同时,在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织凋亡细胞的数量最少,然而与添加20%海藻糖的试验组差异不显著(P0.05)。3.与新鲜睾丸组织相比,冻存后奶山羊睾丸组织T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量显著下降(P0.05),MDA含量显著上升(P0.05)。在冷冻保护液中添加海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量均显著高于对照组(P0.05),MDA含量显著低于对照组(P0.05)。在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织T-AOC活性、SOD活性、CAT活性和GSH含量均高于其他试验组,MDA含量显著低于其他试验组(P0.05)。4.与新鲜睾丸组织相比,冻存后奶山羊睾丸组织Bax基因表达量显著升高(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表达量显著下降(P0.05)。在冷冻保护液中添加海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织Bax基因表达量显著低于对照组(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表达量显著高于对照组(P0.05)。同时,在冷冻保护液中添加15%海藻糖时,冻存后奶山羊睾丸组织Bax基因表达量显著低于其他试验组(P0.05);Bcl-2、HSP70-2、Boule和CREM基因表达量高于其他试验组。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827

【参考文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 马丽;李青旺;吴民耀;;二甲基亚砜对猪精液冷冻保存效果研究[J];动物医学进展;2014年05期

2 王燕;黄绍鑫;方君义;陈莉;汪春红;;亲代母体长期铅暴露对雄性子代断乳大鼠睾丸中谷胱甘肽的影响[J];环境与健康杂志;2014年01期

3 赵和平;解燕茹;;Bcl-2、Bax蛋白表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用[J];世界华人消化杂志;2009年23期

4 唐立新;江芳;范双喜;蒋汉琼;王奇玲;马春杰;邓顺美;文任乾;;比较四种冷冻保护剂对大鼠睾丸组织结构的保护作用[J];中国男科学杂志;2009年04期

5 才秀莲;张先平;郭海;王国秀;;锰对大鼠睾丸SOD/(CAT+GSH-Px)和p53及Bcl-2表达的影响[J];现代预防医学;2008年20期

6 韩妲丽;邢新;王晓云;;睾丸支持细胞与间质细胞的相互作用[J];医学综述;2008年17期

7 丛晶;吴效科;;玻璃化冷冻技术的研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2008年03期

8 龚永光;杨宇如;张炜;顾民;殷长军;;睾丸去神经支配诱发睾丸组织内Bax、Bcl-2基因表达[J];中华男科学杂志;2006年12期

9 黄东晖;赵虎;熊承良;沈继云;周洁玲;;白蛋白与卵黄联合应用于人类精液冷冻保存的研究[J];中华男科学杂志;2006年02期

10 陈国元;邓菁;谭皓;虎凤仙;柴莲花;刘卫东;刘四海;易元川;;维生素E对二硫化碳致雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化的拮抗作用[J];卫生研究;2006年01期