Z染色体miRNAs在早期不同性别鸡胚中的表达及miR-2954的功能分析

发布时间：2017-11-10 07:35

  本文关键词：Z染色体miRNAs在早期不同性别鸡胚中的表达及miR-2954的功能分析

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【摘要】：细胞自主性别决定学说认为Z染色体基因的剂量决定鸡的性别,但确切的决定因子还未知。已有研究表明性染色体miRNAs在哺乳动物生殖发育方面有着重要作用。因此,我们推测鸡Z染色体miRNA可能在鸡性别决定及性分化中起着重要的调控作用。本研究在课题组前期工作基础上,首先通过定量PCR的方法分析了10个Z染色体差异表达miRNAs在E2-E8.5的雌、雄鸡胚或性腺中的时间表达模式,然后检测了雄性高表达的miR-2954在E10.5鸡胚各组织中的表达模式,进而通过双荧光素酶报告基因系统及miRNA超表达和抑制实验研究了miR-2954与靶基因的调控关系。本研究所取得的结果如下:1.Z染色体miRNAs在早期雌、雄鸡胚或性腺中的表达结果表明,mi R-2954、novel-miR-66和novel-mi R-37等七个miRNAs总体上表现为雄性高表达,miR-122-5p在E2.5-E4.5鸡胚中为雄性高表达,而在E5.5-E8.5鸡胚性腺中雌性高表达,miR-2131-5p在E3-E6.5为雌性高于或显著高于雄性;而miR-31-3p在整个时期表达规律不明显,呈连续锯齿状变化。2.miR-2954在鸡胚中的发育及组织的表达谱结果表明,它在E2-E8.5鸡胚及性腺中八个时期和E10.5鸡胚八种组织中的表达均为雄性显著或极显著高于雌性。3.通过软件对miR-2954进行靶基因预测,再结合靶基因功能分析以及mi RNA-靶基因结合结构分析,初步确定了YY1和FOXD1基因为miR-2954的候选靶基因。并利用双荧光素酶报告基因系统对预测的靶基因进行了初步验证,检测结果说明YY1与FOXD1均为miR-2954的靶基因。4.运用定量PCR方法检测了YY1基因在E2-E8.5雌、雄鸡胚及E10.5鸡胚各组织中的表达,结果表明YY1基因在整体上均为雌性高表达但两性中差异不显著,基本呈现与miR-2954表达趋势相反的规律。5.运用定量PCR与western blot方法检测了miR-2954超表达与抑制后YY1的表达,结果表明在mRNA水平及蛋白水平miR-2954均下调YY1的表达。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831

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1 王馨;Z染色体miRNAs在早期不同性别鸡胚中的表达及miR-2954的功能分析[D];华中农业大学;2016年

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本文编号：1165712