沙咪珠利抗柔嫩艾美耳球虫作用机理的初步研究

发布时间：2017-11-10 15:25

  本文关键词：沙咪珠利抗柔嫩艾美耳球虫作用机理的初步研究

  更多相关文章： 沙咪珠利 柔嫩艾美耳球虫 作用阶段 超微结构 烯醇酶 乳酸脱氢酶

【摘要】：鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的一种原虫病。其中,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)是致病性最强的病原之一,常造成很高的发病率和死亡率,每年给养禽业造成巨大的经济负担。目前鸡球虫病防治以药物为主,但耐药性的产生给球虫病的防治带来很大困难。因此积极寻找新型的抗球虫药物及药物作用机制的阐明迫在眉睫。沙咪珠利是本实验室自主合成的一种新型三嗪类抗球虫化合物,前期研究表明其具有广阔的开发前景。为了解沙咪珠利的初步作用机制,我们探讨了沙咪珠利抗E.tenella的作用阶段和峰期、沙咪珠利对E.tenella超微结构的影响和主要作用位点,以及沙咪珠利对与作用位点功能相关的两个重要代谢酶的影响。结果如下:1.在沙咪珠利抗E.tenella的作用阶段和峰期研究中,采用分别在感染前2d(组1)、1d(组2)、感染当天(组3)、感染后1d(组4)、2d(组5)、3d(组6)、4d(组7)开始给予沙咪珠利,每组连续给药3d,同时设置地克珠利对照组、感染对照组和空白对照组。结果,组1、组2和组3的抗球虫指数(Anticoccidial Index,ACI)分别为104±11、92±11和125±16,基本无抗球虫活性;组4、组5、组6和组7的ACI分别为170±8、191±5、171±4、161±5,达到中效和高效抗球虫活性,而地克珠利对照组、感染对照组和空白对照组ACI分别为181±14、73±31和200±2。上述数据表明沙咪珠利在感染后第2d开始连续给药3d抗球虫活性最高,对应的药物作用峰期为球虫的裂殖生殖和配子生殖阶段。2.在沙咪珠利对E.tenella超微结构影响和作用位点的研究中,采用在感染后不同时间点单次灌服15mg/kg沙咪珠利,给药后16h剖杀鸡只,采集盲肠组织,制作超薄切片并观察,发现沙咪珠利对E.tenella裂殖生殖和配子生殖阶段超微结构均有影响:第二代裂殖体和小配子体分化被抑制,裂殖子和小配子体外膜起泡和核周间隙膨大,且裂殖子形态多不规则。小配子体的异常外凸引起了小配子体的退化,大配子体中壁形成体2(Wall formation body 2,WFB2)异常,阻碍了卵囊壁形成,进一步引起合子退化。此外,线粒体、内质网、高尔基体也发生了不同程度的异常。3.烯醇酶(enolase)是一个多功能蛋白,在除糖酵解以外的其它多种生物学过程中也发挥着重要作用。为了解enolase在E.tenella中的药物影响和相关功能,我们分别采用了Real-time PCR、Western Blot和免疫荧光探索了沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子enolase的影响。结果表明沙咪珠利在转录和翻译水平上均下调了enolase的表达;免疫荧光分析显示enolase主要分布于第二代裂殖子的顶端,且与对照组相比,沙咪珠利组荧光强度明显减弱。4.乳酸脱氢酶(LDH)是糖酵解中一个重要的蛋白酶,在多数寄生虫研究中有着重要的意义。本试验通过Real-time PCR、Western Blot、免疫荧光、LDH活性检测和caspase3活性测定的分子手段研究了沙咪珠利对E.tenella第二代裂殖子LDH的影响。结果表明,LDH主要分布在第二代裂殖子的胞浆中,且沙咪珠利作用后LDH在转录水平和翻译水平上表达均下调,裂殖子胞浆和胞核LDH活性均降低,但caspase3活性显著升高。综上所述,这些发现让我们对沙咪珠利的作用机制有了初步了解,也为我们进一步探索其作用机制奠定了基础。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.795

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 ZHOU Zuo-yong;HU Shi-jun;WANG Zhi-ying;GUO Zhi-li;QIN Bo;NIE Kui;;Expression of Chicken Toll-Like Receptors and Signal Adaptors in Spleen and Cecum of Young Chickens Infected with Eimeria tenella[J];Journal of Integrative Agriculture;2014年04期

2 Gang Lu;Xuchu Hu;Can Huang;Yajun Lu;Lixian Wu;Lihua Li;Jing Xu;Xinbing Yu;;Effect of artmether,hemin and Fe~(3+) on recombinant lactate dehydrogenase from Schistosoma japonicum[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2010年12期

3 Gang Lu;Yajun Lu;Lihua Li;Lixian Wu;Zhigang Fan;Dazhong Shi;Hu Wang;Xiumin Han;;Identification and bioinformatics analysis of lactate dehydrogenase genes from Echinococcus granulosus[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2010年10期

，

本文编号：1167223