猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2017-11-11 18:20

  本文关键词：猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

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【摘要】：为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况,本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RDRP)基因序列设计了一套巢式RT-PCR引物,用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带,经克隆、测序后获得的序列与GenB ank数据库序列比对,证明所扩增的序列属于猪诺如病毒,表明本研究成功建立了猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法。该检测方法具有高特异性和敏感性,应用该方法检测某猪场健康育肥猪粪便样品,阳性率为54.5%。通过RDRP基因进行核苷酸同源比对发现本文获得的猪诺如病毒Wuning 1株属于GII群诺如病毒,与美国猪诺如病毒毒株OH-QW101/03/US、中国猪诺如病毒毒株Norovirus pig/GII/Ch6/China/2009核苷酸序列同源性最近。值得注意的是猪诺如病毒Wuning1毒株与武汉人诺如病毒毒株E2120/CHN/2010核苷酸同源性高达77.1%,说明猪诺如病毒Wuning 1毒株与武汉人诺如病毒基因组上亲缘性较近。本研究成功建立了一种检测猪诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并应用于临床猪粪便样品的检测,为猪诺如病毒的诊断与监测提供了可供借鉴的方法、为猪诺如病毒的进化、分子病毒学及与人诺如病毒关系的深入研究提供依据。
【作者单位】： 江西农业大学动物科学技术学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31260611,31372457) 江西省研究生创新专项资金项目(YC2014-S181) 江西省自然科学基金项目(2013BAB204017) 江西省落地计划(2013BAB204017)~~
【分类号】：S852.651
【正文快照】： 诺如病毒(Norovirus)是杯状病毒科,诺如病毒属的成员,现已成为发展中与发达国家非细菌性腹泻的重要致病原之一[1]。该病毒最初在美国俄亥俄州诺瓦克市暴发的一起幼儿患者急性腹泻的粪便中检出。1972年,Kapikian等[2]首次在电子显微镜下观察到诺如病毒粒子形态。该病毒直径约为

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本文编号：1172554