无标记TALEN技术编辑FGF5基因绒山羊细胞株的建立

发布时间：2017-11-12 17:38

  本文关键词：无标记TALEN技术编辑FGF5基因绒山羊细胞株的建立

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【摘要】：成纤维细胞生长因子5(FGF5)是FGFs基因家族因子中的一员,是重要的调节细胞生长的生长因子,FGF5在毛发生长周期中具有重要的调控作用,FGF5基因突变可以导致毛发生长周期中生长期的延长,从而使毛发的长度增加。本研究的目的是建立一种安全有效的方法,设计无标记TALEN技术FGF5基因编辑载体,将无标记TALEN技术FGF5基因编辑载体用电转法转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,筛选阳性细胞并扩繁,为体细胞核移植提供无筛选标记的供体细胞,为创制具有高产绒性状的新型绒山羊种质材料奠定基础。根据绒山羊的FGF5第一外显子基因序列,设计并构建了3对无标记TALEN载体pCS7-FGF5-eT1、pCS7-FGF5-eT2、pCS7-FGF5-eT3,经测序、SSA活性检测以及T7E1酶切鉴定,表明载体构建正确,并且载体pCS7-FGF5-eT2具有活性,可用于后续电转染实验。用电转染法将具有活性的无标记TALEN载体pCS7-FGF5-eT2转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,用单细胞培养法筛选阳性细胞并扩繁,经过测序鉴定,2-29号单细胞株在靶标区域插入单碱基,从而造成了靶标区域下游基因的移码突变,进而将导致FGF5基因不能编码正常的蛋白,建立了无标记FGF5基因的转基因绒山羊细胞株,为生产无筛选标记的转基因内蒙古白绒山羊奠定了基础。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827

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