鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用

发布时间：2017-11-15 18:27

  本文关键词：鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用

  更多相关文章： 猪 伪狂犬病病毒 双重PCR 检测方法

【摘要】：为了检测猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的感染情况,并进行强弱毒株的鉴别诊断,本研究建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的鉴别猪PRV的双重PCR方法。针对PRVgE和gB基因序列,分别设计了2对特异性引物,通过对退火温度(50~60℃,按照1℃递增)、引物浓度(0.2~1.4μL,依次增加0.2μL)的优化,结果表明,双重PCR反应的最佳退火温度为56℃、最适引物添加量为1μL。特异性试验结果表明,该方法可以扩增出PRV gE(316bp)和gB(432bp)的目的片段,对PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大肠杆菌的DNA或cDNA均无扩增。敏感性试验结果表明,PRV gE和gB的最低核酸检出量分别为4.4×103和3.3×103拷贝/μL,与单一PCR方法的敏感性相近。应用该方法对广东、广西地区临床送检的56份组织样品进行检测,检测结果显示,强毒感染阳性率为53.6%(30/56),阴性率为46.4%(26/56),未发现有弱毒感染。
【作者单位】： 佛山科学技术学院;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;
【基金】：广东省自然科学基金项目(S2013010012475)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 伪狂犬病是由伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种致多种家畜、野生动物以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病,是危害养猪业健康发展的重要疾病之一[1-2]。该病是由Aujesz-ky博士首次在匈牙利发现,目前在世界各地已广泛流行[3]。该病毒的宿主范围广,包括牛

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 林群群;郑小香;陈鹏强;陈秋勇;曾显成;胡崇伟;修金生;;猪伪狂犬病病毒NP株gE、gI基因的克隆及序列分析[J];中国畜牧兽医;2015年09期

2 赵雪丽;闫若潜;吴志明;曹伟伟;王淑娟;谢彩华;马震原;周兵强;王东方;;鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用[J];中国畜牧兽医;2015年04期

3 罗亚坤;崔尚金;;猪伪狂犬病病毒和猪博卡病毒混合感染的检测[J];猪业科学;2014年09期

4 黄艺珠;张渊魁;魏建超;曾亮明;朱海侠;翁燕梅;傅星源;俞建萍;潘海城;谢海明;;猪伪狂犬病毒SD株的分离鉴定及TK基因序列分析[J];畜牧与兽医;2013年04期

5 董浩;吴博;张建莹;胡桂学;;猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别PCR检测方法的建立及初步应用[J];中国畜牧兽医;2011年12期

6 杨雪;朱玲;史小红;郭万柱;;基于猪伪狂犬病毒gE基因的PCR法快速诊断猪伪狂犬病的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2010年23期

7 杨毅;李文刚;饶宝;张永涛;吕玉金;;猪伪狂犬病疫苗的研究进展[J];江西农业学报;2010年03期

8 刘丽娜,何启盖,陈焕春,刘正飞,张松林,汪招雄;用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究[J];中国兽医科技;2005年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 朱淑芬;伪狂犬病毒gB基因在毕赤酵母中的表达及初步应用[D];山东农业大学;2012年

2 文昌清;浙江6个规模化猪场伪狂犬病血清学调查及3种伪狂犬疫苗免疫比较试验[D];南京农业大学;2011年

3 王鑫;含GFP报告基因的伪狂犬病病毒Ea株gG基因缺失重组病毒的构建[D];河南农业大学;2008年

4 邱骏;规模化猪场猪伪狂犬病防控的研究[D];华中农业大学;2008年

5 樊淑华;伪狂犬病毒gE基因主要抗原区的表达及其表达蛋白间接ELISA诊断方法的研究[D];河南农业大学;2006年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 练斯南;梁淋;白挨泉;崔尚金;;鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用[J];中国畜牧兽医;2016年05期

2 罗锋;;猪伪狂犬病的防治[J];中国畜牧兽医文摘;2016年05期

3 罗亚坤;练斯南;蔺文成;梁琳;史利军;赵占中;白挨泉;崔尚金;;两广部分地区仔猪腹泻死亡的流行病学调查[J];养猪;2016年01期

4 于新友;李天芝;高鹏;王金良;;猪伪狂犬病毒分子生物学检测方法研究进展[J];猪业科学;2016年01期

5 韦冠东;马萍;汤德元;张元鑫;刘霞;黄涛;曾智勇;李谦;李达;;猪伪狂犬病病毒主要基因变异及与gE/gB基因有关的净化方法研究[J];猪业科学;2016年01期

6 杨凡;徐志文;李萍;方和俊;郭博;周远成;;一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及综合防治措施[J];猪业科学;2016年01期

7 杨涛涛;赵墩;刘崇灵;屈泰龙;余兴龙;;湖南省4株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其免疫与毒力相关基因的序列分析[J];中国畜牧兽医;2016年01期

8 范克伟;戴爱玲;吴德峰;林炜明;卢马英;杨小燕;;猪伪狂犬病毒Jiangxi-FZ株的分离鉴定及其重要毒力基因分子特征[J];中国人兽共患病学报;2015年12期

9 高亮;夏春芳;王传锋;马玉辉;;伊宁市猪伪狂犬病的流行病学调查[J];畜禽业;2015年12期

10 罗亚坤;宋传周;高长彬;梁琳;崔尚金;;猪伪狂犬病病毒和猪博卡病毒混合感染的流行和检测[J];养猪;2015年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 丛鑫;gE/gI/TK三基因缺失伪狂犬病病毒变异株的安全性和免疫原性评价[D];吉林农业大学;2015年

2 王春花;gI/gE双基因缺失伪狂犬病病毒变异株的构建和免疫效力评价[D];中国农业科学院;2014年

3 杨文萍;猪伪狂犬病毒新流行毒株抗原变异与灭活疫苗体液免疫特性研究[D];南京农业大学;2014年

4 李学普;量子点荧光信号放大及其用于猪伪狂犬病的诊断[D];华中农业大学;2013年

5 纪喜文;应对化学/生物袭击的紧急预警系统研究[D];华东理工大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵鸿远;彭金美;安同庆;李琳;冷超粮;陈家锃;王倩;常丹;张秋月;蔡雪辉;童光志;田志军;;猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征[J];中国预防兽医学报;2014年07期

2 郭小参;高晓云;陈红英;杜根成;方剑玉;虞德屏;徐祥臣;张立昌;;猪伪狂犬病毒原阳株gE全基因的克隆与序列分析[J];国外畜牧学(猪与禽);2014年03期

3 杨志远;韩春华;林健;赵景义;李栋梁;刘月焕;;某规模化猪场猪伪狂犬病的诊断[J];中国畜牧兽医;2013年12期

4 史须斌;;猪博卡病毒混合感染的诊治病例[J];中国兽医杂志;2013年06期

5 翟少伦;陈胜男;魏文康;;猪博卡病毒的研究进展[J];病毒学报;2012年02期

6 尤超;赵大球;梁乘榜;周春华;;PCR引物设计方法综述[J];现代农业科技;2011年17期

7 杨雪;朱玲;史小红;郭万柱;;基于猪伪狂犬病毒gE基因的PCR法快速诊断猪伪狂犬病的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2010年23期

8 张智明;任德强;戴秀莉;张立恒;潘兴广;;猪伪狂犬病毒H株gE基因的克隆及序列分析[J];中国畜牧兽医;2010年03期

9 翟少伦;岳城;韦祖樟;冉多良;龙进学;蔺涛;邓宇;孙利厂;黄律;袁世山;;猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用[J];中国动物传染病学报;2010年02期

10 杨毅;李文刚;饶宝;张永涛;吕玉金;;猪伪狂犬病疫苗的研究进展[J];江西农业学报;2010年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 王大伟;抗伪狂犬病毒单克隆抗体的制备及gB基因编码蛋白抗原表位的表达[D];河南科技大学;2011年

2 李t，

本文编号：1190788