pSIP409-NP-M1-DCpep乳酸菌制剂抗H9N2亚型禽流感效果的检测

发布时间：2017-11-17 19:12

  本文关键词：pSIP409-NP-M1-DCpep乳酸菌制剂抗H9N2亚型禽流感效果的检测

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【摘要】：禽流感病毒(AIV)在全世界范围内传播,对家禽和人类健康构成严重威胁。在许多国家,低致病性禽流感病毒如H9N2不仅能够引起雏鸡轻微呼吸道疾病及产蛋量下降,也是造成大量雏鸡养殖严重经济损失的重要原因之一。乳酸菌具有安全易培养的特点,是一种多功能型微生态制剂,作为外源表达载体极具潜力。禽流感病毒的M蛋白(matrix protein,M)与NP蛋白(nucleo-protein,NP)已被证明是有效的候选疫苗抗原,且在不同亚型禽流感病毒之间高度保守。树突状细胞诱导肽(DCpep)源于噬菌体的短肽,能显著增强免疫应答。本文旨在研究使用植物乳杆菌NC8递呈NP-M1-DCpep时,能否增强雏鸡模型免疫应答抗H9N2亚型禽流感病毒感染。为实现这一目的,以1×109 CFU/200μL剂量给20日龄雏鸡灌服乳酸菌制剂NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep,初免和加强免疫后,对雏鸡感染H9N2亚型禽流感病毒,评价乳酸菌制剂NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep抗H9N2亚型禽流感病毒免疫效果。主要研究内容及结果如下:(1)乳酸菌制剂抗H9N2亚型禽流感病毒效果研究雏鸡口服给予NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep,加强免疫后流式细胞术检测雏鸡脾脏CD~(4+)和CD~(8+)T细胞的活化情况,MTS比色法检测雏鸡脾脏淋巴细胞特异性增殖转化能力,并采用间接ELISA法检测加强免疫后雏鸡血清、气管灌洗液中特异性抗体Ig G及SIg A含量。感染H9N2亚型禽流感病毒后,检测雏鸡肺部与喉头病理损伤,监测雏鸡体重丢失情况。结果表明,口服NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能显著诱导雏鸡脾脏强烈的CD~(4+)和CD~(8+)T细胞的活化并增强淋巴细胞增殖转化能力。此外,乳酸菌制剂还能特异性增强雏鸡血清中Ig G抗体滴度及气管灌洗液中SIg A分泌水平。感染H9N2亚型禽流感病毒后,与其它对照组相比,口服乳酸菌制剂NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能显著降低雏鸡肺部及喉头病理损伤程度并且减少雏鸡体重丢失。(2)乳酸菌制剂给药途径的筛选虽然,口服乳酸菌制剂在预防流感病毒感染方面有效果,但由于胃肠道酸性环境及肠上皮细胞或抗原呈递细胞的吸收程度等原因,口服给药及免疫的进展一直相当缓慢。而滴鼻免疫植物乳杆菌由于直接增强呼吸免疫系统在保护抗呼吸道感染方面效果明显[1]。因此,本研究通过滴鼻与口服两种途径免疫乳酸菌制剂,并对雏鸡感染H9N2亚型禽流感病毒,进一步对两种乳酸菌给药途径抗H9N2亚型禽流感病毒效果进行比较。乳酸菌制剂给药途径筛选结果表明,滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep较口服途径能更显著增强气管粘膜SIg A分泌水平,呼吸道粘膜SIg A抗体对抗不同呼吸道病毒感染提供交叉保护作用,与系统性Ig G抗体相比在提高局部免疫应答可能具有更高的抗病毒效果。其中,滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep的雏鸡体重丢失率、肺部及气管病理损伤程度要低于口服免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep。滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能够更显著的诱导雏鸡特异性抗H9N2 AIV感染保护性免疫反应。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S855.3

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本文编号：1197063