CpG佐剂对羊细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

发布时间：2017-11-22 18:12

  本文关键词：CpG佐剂对羊细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

  更多相关文章： pUC18-CpG CpG ODN 细粒棘球蚴病 免疫增强作用

【摘要】：细菌基因组DNA中存在具有免疫学刺激活性、以未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸为核心的脱氧核苷酸序列,即CpG基序(CpG motif)。CpG ODN是指含有CpG基序的寡脱氧核苷酸。CpG ODN通过与胞内受体的TLR9结合,活化pDC细胞、B淋巴细胞、单核细胞等多种免疫细胞,可以作为一种潜在免疫增强剂,激活固有免疫应答,促进免疫细胞分泌产生IL-12、TNF-α、IFN-α/β和IFN-γ等细胞因子,促进Th1型适应性免疫反应。人工合成的含有5’-GACGTT-3’碱基序列的CpG ODN对小鼠免疫系统具有强烈的免疫刺激作用。pUC18-CpG质粒则是将含有10拷贝GACGTT的CpG基序克隆至pUC18载体中构建而成,由本实验室保存。将人工合成的CpG ODN和pUC18-CpG质粒分别刺激RAW264.7细胞,提取总RNA。以反转录的cDNA为模板,采用实时荧光定量PCR方法检测细胞因子和干扰素(IFN-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-12p40)的相对表达量。结果显示,在CpG ODN或pUC18-CpG刺激下,除IFN-γ外,IFN-β、IL-1β、TNF-α、IL-12p40的相对表达量分别达到了17.22±1.33、64.56±3.87、4.45±0.25、79.50±4.87和11.17±1.34、10.61±0.69、5.56±0.41、51.17±2.56,差异显著(P0.05);除TNF-α外,CpG ODN刺激IFN-β、IL-12p40和IL-1β相对表达量较pUC18-CpG刺激表达量差异更显著(P0.05)。重组pET-32a-3Eg95大肠杆菌经IPTG诱导表达,亲和层析纯化出重组蛋白3Eg95。重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN配伍后,免疫小鼠。通过间接ELISA方法监测各组抗体效价平均水平,采用实时荧光定量PCR方法测定体外刺激实验后细胞因子的相对表达量。结果显示,pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14天、28天以及42天ELISA抗体平均水平(OD450nm)分别为3.10±0.07、3.03±0.15、3.22±0.05和2.98±0.10、3.12±0.06、3.27±0.33,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异均显著(P0.05);CpG ODN组抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著(P≥0.05)。体外制备小鼠脾脏淋巴细胞,经重组蛋白刺激后,pUC18-CpG组与CpG ODN组细胞IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88±0.32、2.35±0.45、6.28±0.21和5.03±0.50、2.85±0.18、7.07±1.01,与Quli-A组相比差异均显著(P0.05)。因此,在细胞免疫水平方面,pUC18-CpG和CpG ODN均能上调I型IFN和促炎性因子的表达,具有诱导Th1型免疫反应的特性;相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,两者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗的免疫效果。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.4

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王茹;谢印乾;沈志强;缪晓青;;蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用[J];广东畜牧兽医科技;2006年06期

2 林志彬;;蜂胶的免疫增强作用[J];中国养蜂;1981年04期

3 高晨;李秀萍;郭昌春;于可响;;寡聚脱氧核苷酸对鸡免疫增强作用的研究进展[J];家禽科学;2008年03期

4 王会;何孔旺;;大肠杆菌热敏肠毒素B亚基的原核表达及其免疫增强作用的探讨[J];畜牧兽医科技信息;2011年06期

5 代飞燕,项勋,段纲;中草药的免疫增强作用[J];中兽医学杂志;2004年06期

6 杨满寿;;左旋咪唑的免疫增强作用及其应用[J];青海畜牧兽医杂志;1985年06期

7 郭旭东;刁其玉;史良;;中草药对动物的免疫增强作用[J];饲料工业;2007年08期

8 李慧峰;李子平;单明辉;;归参汤对免疫抑制小鼠的免疫增强作用试验[J];黑龙江畜牧兽医;2013年04期

9 王茹;谢印乾;沈志强;缪晓青;;蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用[J];中国畜牧兽医;2007年02期

10 谢荔朋;;微生物胞外多糖对养殖动物的免疫增强作用[J];福建畜牧兽医;2006年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱娅敏;张彦;张海波;;即食酵母粉对小鼠的免疫增强作用的研究[A];中国营养学会老年营养分会第七次全国营养学术交流会“营养与成功老龄化”暨国家级继续教育项目“神经系统疾病医学营养治疗”资料汇编[C];2010年

2 张小丽;惠爱武;陈萍;朱胤龙;陈瑞明;;稀针嗜兰孢孔菌的免疫增强作用[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年

3 闫若潜;谢彩华;吴志明;李桂喜;张志凌;张健;刘梅芬;;重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对不同种类疫苗免疫增强作用研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

4 王金宝;任慧英;李俊;周顺;;CpG对猪鸡免疫增强作用的初步研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年

5 王金宝;任慧英;李俊;周顺;;CpG对猪鸡免疫增强作用的初步研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

6 杨红振;徐蒿;李靖;白金叶;刘刚;程桂芳;;化合物LG-1的免疫增强作用研究[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年

7 任晓峰;石娜;崔进;孟凡丹;李训良;李鹏冲;斯琴高娃;王超;王鑫;吴丹;李广兴;;猪IL-15对PRRSV GP5基因疫苗免疫增强作用的研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

8 曹新鹏;陈书明;;IL-15的结构特征及生物学功能[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年

9 张七斤;宋新宇;张和平;孟和毕力格;;乳酸杆菌成分对疫苗免疫增强作用的研究[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年

10 李萍;贾宁;;新鱼腥草素钠免疫增强作用及其对雏鸡免疫应答的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 ;现代中药成为抗肿瘤药新宠[N];健康报;2006年

2 沈中巧;阿斯匹林与老年病[N];民族医药报;2008年

3 ;微量元素有利肿瘤防治[N];医药导报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 王晓斌;卡介菌多糖核酸脂质体的制备及其免疫增强作用与安全性研究[D];南京农业大学;2012年

2 翟利娟;口服人参茎叶皂甙对鸡的疫苗免疫增强作用的研究[D];浙江大学;2011年

3 许小琴;IBD基因免疫和Rg_1-CpG对其免疫增强作用及机理的研究[D];吉林大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 陆颖;桑椹中的胰蛋白酶抑制剂及其对桑椹免疫增强作用影响的研究[D];江苏大学;2016年

2 董瑞凯;CpG佐剂对羊细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究[D];中国农业科学院;2016年

3 李金明;“菌毒克星”对动物免疫增强作用的研究[D];福建农林大学;2004年

4 闫志玲;重组鸡白细胞介素-6蛋白免疫增强作用研究[D];河南科技大学;2013年

5 邢效瑞;榆耳（Gloeostereum incarnatum）发酵产物的抗菌及免疫增强作用研究[D];吉林农业大学;2012年

6 王远阁;四种中药多糖免疫增强作用的研究[D];河南农业大学;2007年

7 袁明涛;免疫分子CD154对猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗的免疫增强作用研究[D];华中农业大学;2007年

8 张金萍;CpG-ODN免疫增强作用的实验研究[D];暨南大学;2003年

9 刘蕊娜;鸡白细胞介素6基因的克隆及对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究[D];四川农业大学;2008年

10 孙振红;芦荟提取物抑菌抗病毒及免疫增强作用的研究[D];山东农业大学;2011年

，

本文编号：1215592